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  第二節(jié) 比色分析測(cè)量?jī)x器和測(cè)量方法           ★★★ 【字體:

比色分析測(cè)量?jī)x器和測(cè)量方法(比色分析,吸光光度法,比色測(cè)量?jī)x器)

來(lái)源:醫(yī)學(xué)全在線 更新:2007-8-31 醫(yī)學(xué)論壇

 

 。ǘ┍壬珳y(cè)量?jī)x器

  1.光電比色計(jì)

  光電比色計(jì)用光電池和檢流計(jì)測(cè)量透射光的強(qiáng)度并直接可讀出百分透光率T(%)或吸光度A。圖8-9是581-G型光電比色計(jì)的示意圖。它是利用濾光片把鎢燈產(chǎn)生的白光中與測(cè)定無(wú)關(guān)的光除去,使入射光盡可能是接近溶液補(bǔ)色的單色光,從而提高了比色分析的準(zhǔn)確度。

圖8-9  581-G型光電比色計(jì)光學(xué)線路示意圖

圖8-10 721型分光光度計(jì)光學(xué)系統(tǒng)示意圖1.光源。.,8.聚

光透鏡。.棱鏡 4.準(zhǔn)直鏡5.,11.保護(hù)玻璃 6.入射狹縫 7.

平面鏡 9.吸收池10.光門 12.光電管 13.光柵

  2.721型分光光度計(jì)

  721型分光光度計(jì)的工作波長(zhǎng)范圍為360-800nm。采用真空光電管作為光電能量轉(zhuǎn)換元件,在整個(gè)可見光區(qū)都比較靈敏。同時(shí)采用晶體管放大電路和電表直讀結(jié)構(gòu),儀器的靈敏度和穩(wěn)定性都比較好。

  圖8-10為721型分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)示意圖。由光源發(fā)出的連續(xù)輻射于聚光鏡上,經(jīng)平面鏡轉(zhuǎn)角90度反射到入射狹縫,射入單色器。入射光經(jīng)過(guò)準(zhǔn)直鏡反身射在出射狹縫上,再經(jīng)過(guò)聚光透鏡后進(jìn)入比色皿。經(jīng)溶液吸收后的透射光通過(guò)光門照射在光電管上轉(zhuǎn)換為光電流信號(hào),經(jīng)過(guò)入大后輸入檢流計(jì),由電表直接顯示吸光度。

  二、比色分析的測(cè)量方法

  無(wú)論是光電比色計(jì)還是分光光度計(jì),最常用的測(cè)量方法有如下兩種。

  (一)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

  先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用選定的顯色劑顯色。選用合適波長(zhǎng)的入射光(光電比色計(jì)用濾光片,分光光度計(jì)可轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器)。測(cè)定時(shí)先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%,然后分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線,叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線(或稱工作曲線)。

  例如,測(cè)定維生素B12時(shí),可預(yù)先繪制維生素B12的A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖8-11),再用完全相同的方法和步驟測(cè)定被測(cè)溶液的吸光度,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出被測(cè)溶液的濃度或含量。

  這種方法叫做標(biāo)準(zhǔn)蛐線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線可在固定儀器和方法的條件下多次使用,適合于經(jīng)常性工作。但若儀器不同或測(cè)定方法及條件改變,測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同。因此在更換任何測(cè)定條件時(shí)都需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖8-11 維生素B12的標(biāo)準(zhǔn)曲線

 。ǘ┲苯颖容^計(jì)算法

  若僅對(duì)個(gè)別樣品進(jìn)行測(cè)定,且A-c曲線線性良好,可水作標(biāo)準(zhǔn)曲線而直接比較測(cè)定結(jié)果。

  先配制一個(gè)被測(cè)物質(zhì)溶液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液,與被測(cè)溶液在相同條件下測(cè)定吸光度。根據(jù)下式可以計(jì)算。

A標(biāo)=K標(biāo)c標(biāo)b標(biāo)

A測(cè)=K測(cè)c測(cè)b測(cè)

  由于使用同一波長(zhǎng)的入射光,采用同樣的比色皿,測(cè)定同樣的物質(zhì)。所以

K標(biāo)=K測(cè)

b標(biāo)=b測(cè)

  因此A標(biāo)/A測(cè)=c標(biāo)/c測(cè)

  則c測(cè)=A測(cè)/A標(biāo)×c標(biāo)

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