�。ㄈ�)半薄切片的IGSS染色
IGSS染色的半薄切片，可以在光鏡下直接觀察陽性結果，為電鐿取陽性部位及觀察打下良好的基礎。環(huán)氧樹脂會妨礙免疫組化染色。經過餓酸處理后固定的組織同樣也會影響抗原抗體反應，因此，半薄切片作IGSS染色劑，應作以下處理。
�。�1)脫環(huán)氧樹脂，切片以NaOH的無水乙醇飽和溶液浸泡30～60min，然后以無水乙醇洗5min，兩次，再以95%，80%，70%酒精各洗5min，然后入水。
�。�2)經餓酸固定過的切片入1%過碘酸10min（0.5μm厚，時間可隨切片厚薄增減)除去餓酸，然后蒸餾水洗5min，4次。
�。�3)切片用0.05mol/l TBS,pH7.4洗10min。
�。�4)按石蠟切片第二步往下進行。
三、彩色免疫金銀法（CIGSS)
彩色免疫金銀法（coloured IGSS簡稱CIGSS)是在IGSS基礎上發(fā)展起來的一種新方法。其基本原理與彩色顯影相似。IGSS方法染色在抗原位點處生成銀顆粒經鐵氰化鉀與溴化鉀的作用即被氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑相接觸立即被還原成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產物使彩色成色劑由無色變成有色的染料并沉積在銀顆粒的部位，金屬銀變成了銀離子。由于染料只能通過彩色顯影劑沉積在有銀的部位，所以不與組織發(fā)生非特異性吸附。
以彩色顯影人肝組織內HBsAg的操作過程為例：
（1)脫蠟至水。
（2)0.1%胰蛋白酶37℃10min。
�。�3)Lugol＇s,碘液5min。
（4)5%硫代硫酸鈉1min。
�。�5)用0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，兩次。
�。�6)1%卵白蛋白封閉10min。
�。�7)馬抗HBsAg抗體1：1000稀釋，37℃1～2h 或4℃過夜。
�。�8)0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，兩次。
（9)1%卵白蛋白封閉10min。
�。�10)PAg 1：40，37℃45min。
（11)0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，兩次。
�。�12)雙蒸水洗5min，兩次。
�。�13)物理顯影（見P116頁物理顯影配方)。
�。�14)自來水沖洗。
（15)雙蒸水洗5min，兩次。
�。�16)2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。
（17)雙蒸水沖洗。
（18)彩色顯影（α-萘酚或菲尼酮)2min。
�。�19)雙蒸水沖洗。
�。�20)2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。
�。�21)2%鐵硫代酸鈉和1%亞硫酸鈉，5min。
（22)流水沖洗。
�。�23)如需要可用蘇木素或核紅復染。
�。�24)緩沖甘油封固，觀察。
結果：CIGSS的優(yōu)點：①陽性結果比黑色更鮮明;②可以使弱信號得到放大;③消除IGSS背景染色;④信號/背景比值高;⑤是開展免疫金銀雙標技術的新途徑.光鏡下見HBsAg陽性物質呈鮮艷的藍色(α-萘酚為成色劑)或呈綠色(菲尼酮為成色劑)。背景干凈，陽性結果清楚。
四、免疫金及免疫金銀技術的優(yōu)點
免疫金銀技術（Immunogold—sliver Technique)是在免疫金基礎上發(fā)展的新興的先進的免疫細胞化學檢測技術，它比免疫熒光，免疫酶標技術有許多獨特的優(yōu)點。
1．制備簡單制備膠體金所需要儀器設備及試劑一般實驗室都具備，市場上也容易購置。制備方法簡單，易行。
2．標記簡單抗體、凝集素、酶、SPA、激素等很容易通過物理吸附作用與膠體金顆粒相結合形成穩(wěn)定的金標復合物。由于在標記過程中不需要經過任何化學方法交聯(lián)，抗體的生物活性可保持不變，標記方法簡單容易。
3．適用范圍廣 膠體金銀技術既能用于光鏡也能用于透射及掃描電鏡，同時還可用于X線能譜分析。在熒光顯微鏡上添置一塊特制的濾板（IGs filter block)還可直接對膠體金顆粒進行觀察，金顆粒在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)明亮的點狀物，定位準確，敏感性高，標本可長期保存。
4．特異性強免疫金探針的非特異性吸附作用小，較少受生物組織背景因素的影響，在抗原或抗體的檢測中顯示出高度的特異性。
5．敏感性高由于金顆粒的電子密度很大特別適合透射電鏡及掃描電鏡，因此，免疫金銀法用于電鏡，其檢測抗原或抗體率遠遠超過酶反應物，從而大大改進了免疫細胞化學技術在電鏡水平上的分辨率。光鏡下金顆粒經過銀顯影后得到放大，用于檢測組織細胞抗原時其敏感性比PAP法高200倍。我們檢測肝炎表面抗原時比ABC法高6倍，是至今為止最為敏感的免疫細胞化學方法，特別適合于檢測微量抗原及石蠟切片標本中的微弱抗原。
應用彩色IGSS和IGSS雙標及多標記，可在同一張切片上檢測兩種以上的抗原成份。膠體金可以制備成不同大小的顆粒，將不同直徑的膠體金分別標記不同的抗體或抗原，可以在同一張標本上同時區(qū)分出兩種或兩種以上的抗原或抗體，非常適用于電鏡水平的雙標和多標記，為研究細胞內抗原及多種抗原的表達及各種抗原分子相互之間的關系等提供了最佳手段。
免疫金銀技術是新興的科學技術，目前許多實驗室越來越廣泛地采用這一新技術，從而使它的發(fā)展有了扎實的基礎。用免疫熒光、免疫酶技術、放射免疫技術可做的工作，均可使用免疫金銀技術。另外，這一新的方法在其它技術的配合下不斷地得到更新與進步，使它能經常增添新的內容，特別是免疫金和膠體金示蹤作為一門獨特的新技術將在生物醫(yī)學及其它領域的研究中發(fā)揮著越來越大的作用。
