抗獨(dú)特型抗體及其在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用

　　針對(duì)外來(lái)抗原的抗體分子（Ab1)可變區(qū)上Id可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗Id抗體（Ab2)。Ab2β具有與外來(lái)抗原相似的氨基酸排列順序或空間構(gòu)型，它能夠在體內(nèi)模擬始動(dòng)抗原的作用。應(yīng)用Ab2β的這一特性，可有目的地制備Ab2β，將其作為抗原的替代物用于基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)研究。

　　一、抗獨(dú)特抗體的制備

　�。ㄒ�)抗原及其用量的選擇

　　由于Ab2是針對(duì)Ab2Id的抗體，因而制備Ab2時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)腁b1作為免疫原。所用抗原的用量依照給予抗原的種類、次數(shù)、途徑以受體動(dòng)物的耐受性而有所不同。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)受體動(dòng)物為小鼠時(shí)，常用Ab1最為50-200μg；若受體動(dòng)物為家兔時(shí)，使用的Ab1量可達(dá)100-200μg。

　�。ǘ�)免疫動(dòng)物的選擇

　　抗獨(dú)特型抗體可在自身體內(nèi)、同類系、同種異體以及異種動(dòng)物中誘導(dǎo)產(chǎn)生，因此在制備抗獨(dú)特型抗體時(shí)可根據(jù)不同情況選用同類系、同種異體或異種動(dòng)物（表9-1)。從制備技術(shù)上講，可以制備單克隆抗Id和多克�。�免疫血清)抗Id。

表9-1 不同宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別的抗體決定簇及抗獨(dú)特型抗體的制備

　　1.同類系動(dòng)物　用某一種抗原免疫某一品系的動(dòng)物，分離純化的Ab1再免疫相同品系的另外一只動(dòng)物，可獲得抗獨(dú)特型體。例如Uytdegaag等將Ⅱ型脊髓灰質(zhì)炎病毒免疫BALB/c小鼠，經(jīng)雜交瘤技術(shù)制備了單克隆抗體（Ab1),再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制備了單克隆Ab2。

　　2.同種異型動(dòng)物　Seto等從一只品系為a3b4家兔血清中純化出IgG作為Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制備的抗血清中，除了含有抗Id外，還含有抗同種異型決定簇的抗體。

　　3.異種動(dòng)物　例如用人IgM作為Ab1免疫小鼠制備單克隆Ab2。由異種動(dòng)物免疫制備的Ab2血清中，除抗Id外還含有抗同種型的抗體。

　�。ㄈ�)抗獨(dú)特型抗體的檢測(cè)

　　抗Id抗體的鑒定至關(guān)重要。通常采用免疫學(xué)檢測(cè)方法如ELISA、RIA、免疫熒光和中和試驗(yàn)等，可根據(jù)具體條件和需要加以選用�？笽d的鑒定必須設(shè)置充分的對(duì)照，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。例如，在鑒定小鼠源性抗原特異性人IgM抗獨(dú)特型抗體時(shí)，用正常人IgM作為對(duì)照。將Ab1（抗原特異性人IgM)包被微孔板，然后加檢測(cè)樣品（小鼠源性抗Id)，再加抗鼠的標(biāo)記抗體，為了克服非特異性鼠抗人IgM同種型Ig造成的假陽(yáng)性，同時(shí)用非特異性人IgM包被微板作為對(duì)照（圖9-9)。當(dāng)試驗(yàn)孔為陽(yáng)性、對(duì)照孔為陰性時(shí)可基本確定為抗Id抗體。

圖9-9 用ELISA間接法檢測(cè)鼠源性單克隆抗Id示意圖

　　二、抗獨(dú)特型抗體在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

　　抗獨(dú)特型抗體不僅對(duì)于免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)的理論研究具有重要意義，而且在傳染性疾病的預(yù)防、自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)理研究和惡性腫瘤的治療等應(yīng)用研究中也具有重要的價(jià)值。

　　（一)抗獨(dú)特型抗體與疫苗

　　抗獨(dú)特型抗體中Ab2β作為抗原的模擬物，可代替病原體的抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗病原體的特異性免疫應(yīng)答，即所謂抗獨(dú)特型疫苗（anti-idiotype vaccine)。目前，抗獨(dú)特型疫苗研究仍處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究階段，疫苗的范圍主要有病毒、細(xì)菌和原蟲(chóng)等引起的傳染�。ū�9-2)。

　　1.抗病毒的抗獨(dú)特型疫苗　針對(duì)病毒感染的抗獨(dú)特型疫苗是近年來(lái)較活躍的研究領(lǐng)域。Reagan將狂犬病毒糖蛋白特異的單克隆抗體免疫動(dòng)物，制備出抗Id抗體，將這些抗體注射小鼠后，可誘導(dǎo)出具有病毒特異性中和活性的抗體應(yīng)答。Kennedy等用抗HBsAg抗體制備出抗獨(dú)特型抗體，經(jīng)親和層析純化后注射于BALB/c小鼠，誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)HBsAg的體液免疫應(yīng)答。

　　Uytdehaag等用對(duì)Ⅱ型脊隨灰質(zhì)炎病毒特異的保護(hù)性單克隆抗體（Ab1)免疫BALB/c小鼠,制備出單克隆Ab2，用Ab2免疫BALB/c小鼠后，可誘導(dǎo)出Ab3，產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的保護(hù)性免疫，這種單克隆Ab2可用于預(yù)防Ⅱ型脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染。Tanaka等在BALB/c小鼠中用抗新城疫病毒（NDV)血凝素的抗體誘導(dǎo)出抗Id抗體，在無(wú)病毒抗原存在的情況下，這種抗Id抗體可刺激小鼠產(chǎn)生抗NDV抗體。Lathey用單純皰疹病毒（HSV)糖蛋白D特異的McAb制備了抗Id抗體，并在小鼠中誘發(fā)對(duì)HSV的免疫應(yīng)答。用人工合成HIV包膜抗耕牛的735-752氨基酸段的多肽免疫黑猩猩制得Ab1，再用Ab1免疫家兔制備Ab2，將Ab2免疫小鼠獲得Ab3，實(shí)驗(yàn)表明，Ab3能與HIV多肽抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

圖9-10 HBsAg抗Id的實(shí)驗(yàn)研究（Kennedy,1984)

　　2.抗細(xì)胞菌和原蟲(chóng)的抗獨(dú)特型疫苗　抗Id抗體也可用于誘導(dǎo)針對(duì)細(xì)菌和原蟲(chóng)的保護(hù)性免疫應(yīng)答。例如，用Ab2誘導(dǎo)動(dòng)物針對(duì)肺炎球菌、大腸桿菌（K13)、血吸蟲(chóng)和羅德西亞錐蟲(chóng)等病原體的保護(hù)性免疫。其Ab2的制備和研究方法與病毒性抗Id疫苗研究類似。

　　抗Id作為疫苗有以下優(yōu)點(diǎn)：（1)不含有傳染性物質(zhì)；（2)可大量制備抗Id的McAb；（3)某些保護(hù)性抗原決定簇為碳水化合物，不能用DNA重組技術(shù)獲得，而某些抗Id可模擬碳水化合物抗原決定簇；（4)能誘導(dǎo)比滅活病毒更為有效的T細(xì)胞應(yīng)答；（5)誘導(dǎo)抗原決定簇特異性的抗Id疫苗。應(yīng)該看到，抗Id疫苗的免疫應(yīng)答水平一般較低，大劑量鼠源性免疫球蛋白可能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗異種蛋白的免疫反應(yīng)以及過(guò)敏反應(yīng)。因此，在臨床實(shí)際應(yīng)用中，制備人源性抗Id疫苗，應(yīng)該看到，抗Id疫苗的免疫應(yīng)答水平一般較低，大劑量鼠源性免疫球蛋白可能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗異種蛋白的免疫反應(yīng)以及過(guò)敏反應(yīng)。因此，在臨床實(shí)際應(yīng)用中，制備人源性抗Id疫苗，提高抗Id疫苗的免疫原性，以及細(xì)胞工程和基因工程相結(jié)合等方面有待進(jìn)一步深入研究。

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