新購人的血細胞計數(shù)儀都需要進行校正, 但是有些儀器在出廠前已為用戶校正完畢,用戶在使用標準品進行測定時,得到的數(shù)值均在允許范圍以內,一些早期生產的血細胞計數(shù)儀,如CO ULTREZF型等,在使用前應作閾值選擇, 以分別確定該儀器做白細胞和紅細胞計數(shù)的最佳閾值。一些新型的血細胞計數(shù)儀則可通過校正系數(shù)或調整計數(shù)時間等方法完成校正工作。
1.閾值的選擇
最初的電子血細胞計數(shù)儀不僅計數(shù)人血細胞,也可以計數(shù)其他細胞和顆粒,所以也稱粒子計數(shù)器。因所計數(shù)的各種粒子,包括紅細胞、白細胞、血小板的體積大小相差不一,所以應分別選擇出計數(shù)各種粒子的最佳閾值。
計數(shù)人血細胞的最佳閾值選擇。按儀器要求的稀釋倍數(shù)稀釋血標本,為消除稀釋誤差可一次性稀釋成50 ml 樣品。測白細胞應先加入溶血劑,將標本放于計數(shù)樣品臺上,從閾值選擇“1”開始,在每個閾值點上計數(shù)數(shù)次,記錄每個閾值點上的計數(shù)值或均值。以細胞數(shù)為縱坐標,以閾值點為橫坐標,畫一曲線。如曲線中平坦部分太寬,則表示儀器不太敏感,曲線中平坦部分太窄則儀器工作重復性不好,誤差大。應找出曲線平坦部位較為適中的曲線中間點或中間點偏低一側的閾值點作為該項細胞計數(shù)的最佳工作點。閾值設置太高,會使體積較小的細胞不被計入,閾值設置太低則會使體積更小的顆粒、細胞碎片和儀器電子噪音誤作細胞而被計入,使得結果偏高。因此儀器選定閾值對細胞計數(shù)的準確性是很重要的,該類型儀器以每半年重復校正1 次閾值為好。新型的血細胞計數(shù)儀多數(shù)已由廠家按計數(shù)人血細胞的標準選擇好了閾值的上下限,不需使用者更改。
2.校準物校正法
許多國外儀器生產廠家為自己的儀器準備了商品校準物,如4C-PLUS、S-CAL、HEAMA-QC等。這種商品校準物一般包含8~10 余項參數(shù)的平均值和范圍,并有高、正常、低三種不同的濃度,有效期一般為3個月左右。國內目前有各檢驗中心制備的標準血紅蛋白和白細胞等3~4 種質控標準物。使用校準物時應將標本按要求進行稀釋,每個指標應做5個稀釋,測定5 次,每個參數(shù)的CV<3%,求出每個參數(shù)的均值,它們應在校準物給定的范圍以內。如不在該給定范圍之內,首先應仔細查找原因, 包括試劑、電壓、稀釋、操作、校準物本身等,一切外源性因素排除之后,要在有經驗的技術人員仔細閱讀說明書后,才可考慮調整儀器的校正機關。
3.使用參考儀器校正法
取一份或幾份不同濃度的新鮮EDTA 抗凝血,選定一臺經過校正的血細胞計數(shù)儀作為參考儀器,用該參考儀器對該份E DT A 抗凝血進行定值, 每項指標至少測定10 次,求其平均值和95%的可信限范圍(CV<3%)。以各項目的平均值做為標準, 按校準物校正來校正新購人的儀器。此方法雖易于開展,但所選擇的參考儀器必須嚴格掌握。如本單位無合格的儀器,選用本市或本地區(qū)的經過校正的儀器,或經本地區(qū)及上級臨床檢驗中心多次質控考核合格的儀器作為參考儀器。此外,也可采用顯微鏡下計數(shù)的方法,分光光度計法,溫氏離心法來分別測定紅白細胞,血紅蛋白和紅細胞比容。要求經驗豐富的技術人員在最佳條件下反復測定多次,得到各項目的參考值范圍。但是由于方法學上的差異,不易得到一個穩(wěn)定的,精密度良好的參考值。故不推薦用顯微鏡計數(shù)法來校正電子血細胞計數(shù)儀。