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1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
40只雄性Wistar大鼠購(gòu)于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重300～320g。
2 方法
2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
將C6細(xì)胞分裝于數(shù)只75cm2(底面積)的培養(yǎng)瓶中。加入適量含有體積分?jǐn)?shù)為10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,置入溫度37℃、CO25％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，以胰蛋白酶適量消化3～5min后，棄去消化液。用Hanks液吹打沖洗1～2次形成細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度為每10μl含1.5×106個(gè)C6細(xì)胞的懸液用于接種。
2.2 顱內(nèi)接種
將麻醉后的大鼠頭部固定在腦立體定向儀上，剪去頭頂部毛發(fā)，碘伏消毒后鋪洞巾。取內(nèi)眥連線與頭部正中矢狀面交點(diǎn)向后縱向切開(kāi)頭皮約1cm，分離暴露顱骨。根據(jù)Batker法確定右尾狀核靶點(diǎn)，于冠狀縫前1mm，中線右旁開(kāi)3mm，以牙科鉆在顱骨上鉆孔，孔徑約1.2mm，深達(dá)硬腦膜表面而不傷及腦組織。25μl微量注射器抽取C6細(xì)胞懸液10μl，沿骨孔緩慢勻速注射10min，注射完畢后留針5min，緩慢退針，骨孔用醫(yī)用明膠海綿填充，骨蠟封閉。生理鹽水沖洗手術(shù)區(qū)，無(wú)菌絲線縫合切口后消毒皮膚，術(shù)后加用青霉素抗感染，整個(gè)過(guò)程在層流超凈臺(tái)中進(jìn)行，麻醉復(fù)蘇后單籠常規(guī)飼養(yǎng)14天醫(yī).學(xué).全.在.線m.payment-defi.com。
2.3 實(shí)驗(yàn)分組
將40只大鼠隨機(jī)分為冰片＋順鉑治療組；單用順鉑組；冰片組；空白對(duì)照組，共4組，每組10只。
2.4 大鼠體內(nèi)治療實(shí)驗(yàn)
于術(shù)后14天，實(shí)驗(yàn)組：灌服10％的冰片石蠟油溶液（m/v)3ml/kg/次，1h后大鼠尾靜脈注射順鉑1μg/g,以后每48h給同等劑量冰片+順鉑1次,共計(jì)3次。冰片組單用冰片石蠟油溶液�？瞻讓�(duì)照組則采用同體積石蠟油溶液，無(wú)冰片組則未加冰片，其余方法相同。
2.5 試驗(yàn)紀(jì)錄
①觀察大鼠活動(dòng)狀態(tài)。②腫瘤最大橫徑測(cè)量。于腫瘤接種21天取大鼠全腦,10%甲醛溶液固定后沿腫瘤中心作冠狀切面,水平方向測(cè)量每個(gè)腫瘤最大橫截面面積(包括壞死等病變組織)。③組織病理學(xué)檢查：所有腦標(biāo)本固定，脫水，常規(guī)石蠟切片，片厚4μm，HE染色，光鏡下觀察。
2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行LSD檢驗(yàn)分析。
3 結(jié)果
