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重組人生長激素的測定—高效液相色譜法-分子排阻色譜法

醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫中心 藥學(xué)論壇 重組人生長激素的測定—高效液相色譜法-分子排阻色譜法
方法名稱:
重組人生長激素的測定—高效液相色譜法-分子排阻色譜法
應(yīng)用范圍:

本方法采用高分子排阻色譜法測定重組人生長激素的含量。

本方法適用于重組人生長激素。

方法原理:

供試品制成磷酸鹽緩沖液(pH7.0)的溶液,進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外吸收檢測器,于波長214nm處檢測重組人生長激素的吸收值,計算出其含量。

試劑:

1. 異丙醇

2. 磷酸鹽緩沖液(pH7.0)

儀器設(shè)備:

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

適合分子量為5000-60000球狀蛋白的色譜用親水硅膠為填充劑。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相:異丙醇+磷酸緩沖液= 3+97

2.2 檢測波長:214nm

2.3 柱溫:室溫

2.4 流速:0.6mL/min

試樣制備:

1. 磷酸鹽緩沖液(pH7.0)

無水磷酸氫二鈉5.18g,磷酸二氫鈉3.65g,加水950mL,用85%磷酸溶液調(diào)pH值至7.0,加水至1000mL。

2. 稱取供試品

精密稱取本品粉末適量。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取重組人生長激素單體與二聚體混合對照品適量,用磷酸鹽緩沖液制成每1mL含1.0mg的溶液。

4. 供試品溶液的制備

供試品置于索氏提取器中,加磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋成每1mL含1.0mg的溶液,混勻,作為供試品溶液。

注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一!熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟:

分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液20μL 注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測器,于波長214nm處測定重組人生長激素單體與二聚體的吸收值,計算出其含量。

參考文獻(xiàn):

中華人民共和國藥典,國家藥典委員會編,化學(xué)工業(yè)出版社,2005年版,二部,p.413。

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