方法名稱： |
復(fù)方丹參片—原兒茶醛和丹參酮ⅡA的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參片中原兒茶醛和丹參酮ⅡA的含量。 本方法適用于中藥制劑復(fù)方丹參片。 |
方法原理： |
供試品于錐形瓶中，分別加水和85%乙醇進(jìn)行超聲處理，放冷，離心，上清液濾過(guò)，得濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm和269nm處檢測(cè)原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2. 乙醇 3. 醋酸 4. 醋酸銨 |
儀器設(shè)備： |
1. 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Shimpack CLC-ODS色譜柱（150×6.0mm，5μm)。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2. 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：甲醇 0.2mol/L醋酸銨緩沖液（pH=2.2) = 10 90 和甲醇 水 = 85 15 2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm、269nm 2.3柱溫：35℃ |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取本品12片研細(xì)的藥粉（過(guò)5號(hào)篩，80目)，分為2份，一份相當(dāng)于4片藥粉，另一份相當(dāng)于8片藥粉。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取原兒茶醛對(duì)照品適量，水溶解制成1.53，3.06，6.12，12.24，18.36μg/mL的系列 濃度對(duì)照品溶液。 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，用95%乙醇溶解制成1.56，3.12，6.24，12.48，18.72μg/mL 的系列濃度對(duì)照品溶液。 3.供試品溶液的制備 取一份供試品置100mL錐形瓶中，加水30mL，超聲處理30分鐘后，放冷，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶，用水稀釋至刻度，以10000r/min離心5min，上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液為供試品溶液Ⅰ（測(cè)定原兒茶醛)。 取另一份供試品置100mL錐形瓶中，加85%甲醇30mL，超聲處理15分鐘后，放冷，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶，用85%甲醇稀釋至刻度，以10000 r/min離心5min，上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液為供試品溶液Ⅱ（測(cè)定丹參酮ⅡA)。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm和269nm處測(cè)定原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm和269nm處測(cè)定原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
李元智，黃英，劉三康等. HPLC測(cè)定復(fù)方丹參片中原兒茶醛和丹參酮ⅡA. 華西藥學(xué)雜志，1996，11（4)：213-215. |
