方法名稱： |
注射用雙黃連（凍干)—連翹苷的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定注射用雙黃連（凍干)中連翹苷的含量。 本方法適用于中藥制劑注射用雙黃連（凍干)。 |
方法原理： |
供試品于分液漏斗中，加水溶解，以氯仿提取，收集氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙舛ㄈ�，過濾，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)277nm處檢測(cè)連翹苷的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
試劑： |
1. 乙腈（色譜純) 2 .甲醇 3 .乙醇 4 .乙酸鉛 5 .中性氧化鋁（100-200目) |
儀器設(shè)備： |
1. 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 ODS Hypersil色譜柱（125×4mm，5μm)，理論塔板數(shù)以連翹苷峰計(jì)算為5449。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2. 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：乙腈 水 = 25 75 2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：277nm 2.3柱溫：室溫 |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取本品粉末（過五號(hào)篩-80目)試樣適量（相當(dāng)于連翹生藥8g)。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取連翹苷對(duì)照品5mg，置25mL量瓶中，加甲醇適量超聲處理使溶解，并稀釋至刻度，混勻，得對(duì)照品溶液。 3.供試品溶液的制備 將供試品置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40mL，將塞塞緊，精密稱定重量，超聲處理20分鐘，取出錐形瓶，放冷，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液20mL，加乙酸鉛2g，過濾，精密量取續(xù)濾液10mL，置水浴上蒸至近干，加0.5g中性氧化鋁拌樣后，水浴蒸干，加于中性氧化鋁柱（100-200目層析用中性氧化鋁1g，柱內(nèi)徑10-15mm)上，以70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，水浴濃縮至干，濾過，殘留物以50%甲醇適量超聲處理使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取對(duì)照品溶液0.5，2，6，10，15，20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)277nm處測(cè)定連翹苷的吸收值，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)277nm處測(cè)定連翹苷的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
聶東東，楊麗娟，宋維秋. HPLC法測(cè)定雙黃連制劑中連翹苷的含量. 中國(guó)藥房，2000，11（6)：275-276. |
