決明子-大黃素和大黃酚的含量測(cè)定方法-HPLC

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方法名稱(chēng)：	決明子-大黃素和大黃酚的含量測(cè)定-HPLC
應(yīng)用范圍：	用于決明子中大黃素和大黃酚的含量測(cè)定
方法原理：	本品粉末分別加甲醇超聲提取和氯仿回流提取，經(jīng)液相色譜分離，在254 nm處測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件：	儀器島津高效液相色譜系統(tǒng)：ODS—C₁₈色譜柱，LC-6AD泵，SPD—M10AVP紫外檢測(cè)器，Shidamzu色譜工作站色譜條件色譜柱：ODS—C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm) 流動(dòng)相：甲醇—0.1 %磷酸溶液（85：15) 流速：1.0 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm 柱溫：25 ℃
試樣制備：	對(duì)照品溶液制備分別精密稱(chēng)取大黃素和大黃酚各2.5 mg，分別置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，配制成濃度均為0.1 mg/mL的大黃素和大黃酚貯備液。分別精密量取大黃素貯備液0.4 mL和大黃酚貯備液0.8 mL，置同一10 mL量瓶中，加甲醇稀釋?zhuān)吹煤簏S素40 μg/mL和大黃酚80 μg/mL的對(duì)照品溶液。供試品溶液制備 1)超聲波提�。喝》鬯檫^(guò)4號(hào)篩的決明子粉末，精密稱(chēng)定，置100 mL帶塞錐形瓶中。加入甲醇（乙醇)25 mL，超聲波提取30min，冷卻，用甲醇（乙醇)補(bǔ)足減失的重量。高速離心（8000 r/min，15 min)，取5 mL上清，置50 mL圓底燒瓶中，揮去甲醇（乙醇)，加2.5 mol/L硫酸液10 mL，超聲處理5 min。再加氯仿10 mL，加熱回流60 min，冷卻，置分液漏斗分取氯仿層，氯仿液移至100 mL錐形瓶中，置水浴上揮去氯仿。殘?jiān)芗蛹状?0 mL，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。2)回流提�。喝》鬯檫^(guò)4號(hào)篩的決明子粉末，精密稱(chēng)定，置50 mL帶塞錐形瓶中。加入甲醇（乙醇)25 mL，70 ℃回流30 min，冷卻，用甲醇（乙醇)補(bǔ)足減失的重量。后續(xù)步驟同超聲波提取，即得。
操作步驟：	分別精密吸取大黃素和大黃酚混合對(duì)照液以及決明子供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以外標(biāo)法計(jì)算大黃素和大黃酚含量。
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備注：
參考文獻(xiàn)：	廖海，周嘉裕，何成生等. 決明子大黃素和大黃酚的提取與含量測(cè)定. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2007，18（6)：1332～1333