方法名稱: |
何首烏—蒽醌類成分的測定—HPLC-UV |
應(yīng)用范圍: |
用于何首烏中蒽醌類成分含量的測定 |
方法原理: |
本品用甲醇加熱回流,經(jīng)液相色譜儀分離,在254nm處測定峰面積,以外標(biāo)法計算含量。 |
儀器設(shè)備及實驗條件: |
儀器設(shè)備 LC-10ATvp 高效液相色譜儀;SPD-10ATvp 紫外-可見檢測器, HW-2000色譜工作站。 色譜條件 色譜柱:DiamonsilC18 (250mm ×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸(85∶15);流速:1.0 mL/mim,檢測波長:254nm;柱溫:室溫。 |
試樣制備: |
對照品溶液制備 精密稱取大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量,加甲醇分別制成每1mL含大黃酸1. 600mg、大黃素1.680mg、大黃酚1.720 mg、大黃素甲醚1.600mg的溶液,作為對照品儲備液;分別精密量取上述對照品儲備液各1 mL,置10mL 量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為對照品溶液Ⅰ;再分別精密量取上述對照品儲備液各1mL,置20mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為對照品溶液Ⅱ(每1mL中含大黃酸0.0800mg、大黃素0.0840mg、大黃酚0.0860mg、大黃素甲醚0.0800mg) 。 供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)10g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加甲醇50mL,稱定重量,水浴回流1h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為測定游離蒽醌的供試品溶液; 再精密量取續(xù)濾液10mL,置錐形瓶中,水浴揮干,加2.5mol/L 硫酸20mL,超聲處理5min,加三氯甲烷20 mL,水浴回流1h,放冷,移至分液漏斗中,分取三氯甲烷液,酸水液用三氯甲烷提取3次,每次15mL,合并三氯甲烷液,水浴揮干,殘渣用適量甲醇溶解,移置10 mL量瓶,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為測定總蒽醌的供試品溶液。 |
操作步驟: |
精密吸取對照品溶液Ⅱ以及供試品溶液10μl,分別注入液相色譜儀,按上述色條件測定峰面積,計算含量。 |
附件: |
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備注: |
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參考文獻: |
嚴(yán)寒,靜傅軍,梁從慶等不同采集地何首烏中蒽醌類成分的含量測定.中成藥.2007, 29(7):1023~1026 |