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一種檢測(cè)口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒及應(yīng)用

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1308461C  
公開(kāi)(公告)日 2007.04.04  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200410061422.6  
申請(qǐng)日期 2004.12.24  
專(zhuān)利名稱(chēng) 一種檢測(cè)口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒及應(yīng)用  
主分類(lèi)號(hào) C12Q1/68(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/25(2006.01)I;G01N33/569(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 武漢大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 鄭從義;顧潮江;屈三甫  
地址 430072湖北省武漢市武昌珞珈山  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 武漢宇晨專(zhuān)利事務(wù)所  
代理人 王敏鋒  
國(guó)省代碼 湖北;42  
主權(quán)項(xiàng) 一種檢測(cè)口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒,該試劑盒含有:a)RNA抽提液,b)逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,c)RNA酶抑制劑,d)引物和TaqMan探針,e)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性RNA模板,f)RT-PCR熒光定量反應(yīng)液,其特征是:引物序列分別為正義引物:5’-GAACACATTCTTTACACCAGGAT-3’,反義引物:5’-CATATCTTTGCCAATCAACATCAG-3’,擴(kuò)增子大小為121bp,熒光探針序列為:5′FAM-ACAACCTACCGCCGAGCCAATTC-TAMRA-3′,探針的5′端標(biāo)記熒光發(fā)射基團(tuán)FAM,靠近3’端標(biāo)以熒光淬滅基團(tuán)TAMRA,標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性RNA模板由已插入口蹄疫病毒3D區(qū)121bp片段的pGEM-T載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH45α,增殖后提取質(zhì)粒進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄制備RNA,并于紫外分光光度計(jì)測(cè)A260定量并10倍梯度稀釋。  
摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)口蹄疫病毒的熒光定量PCR試劑盒及應(yīng)用,該試劑盒利用熒光探針(TaqMan)和正義引物、反義引物并直接以體外轉(zhuǎn)錄RNA標(biāo)準(zhǔn)品作為逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增的雙重對(duì)照,使得定量結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠?筛咝Х奖愕貙(duì)病毒疫苗的效價(jià)進(jìn)行定量檢測(cè)和質(zhì)量監(jiān)控及對(duì)口蹄疫爆發(fā)疫情進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,同時(shí)可廣泛用于動(dòng)物產(chǎn)品的進(jìn)出口及動(dòng)物食品的安全檢測(cè),也可為相關(guān)基礎(chǔ)研究提供技術(shù)支持,應(yīng)用前景十分廣泛。  
國(guó)際公布  
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