| 公開(公告)號 | CN1876820A |
| 公開(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申請(專利)號 | CN200610016880.7 |
| 申請日期 | 2006.05.26 |
| 專利名稱 | 一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化方法 |
| 主分類號 | C12N15/85(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/85(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 吉林大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 孔 維;殷玉和;孫 博 |
| 地址 | 130012吉林省長春市前衛(wèi)路10號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 魏征驥 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化方法，包括以下步驟： 一、在含有5-20kb質(zhì)粒DNA的裂解液中，加入氯化鈣或硫酸銨溶液，使終濃度為0.2-2M/L鹽析沉淀，過孔徑1.0um濾膜得到澄清的裂解液； 二、使含有質(zhì)粒DNA的裂解液經(jīng)過超濾裝置而過濾，截留分子量100-750KD之間，除去大部分RNA，并通過合適的透濾液進(jìn)行透濾； 三、將超濾獲得的濃縮裂解液上樣到離子交換層析介質(zhì)柱子后，經(jīng)過濃度為0.1-0.5M的氯化鈉洗脫液洗去雜質(zhì)，用濃度為0.5-1M的氯化鈉洗脫液洗脫后，得到含行質(zhì)粒DNA的洗脫液； 四、將步驟三中得到的含有質(zhì)粒DNA的洗脫液，用硫酸銨調(diào)節(jié)電導(dǎo)率為100-300ms/cm，上樣到預(yù)先平衡好的疏水層析介質(zhì)柱子后收集流穿峰； 五、將疏水流穿峰樣品上樣到分子篩層析介質(zhì)柱子，收集第一個峰； 六、將步驟五得到的分子篩樣品，經(jīng)過過濾器和超濾器聯(lián)動裝置使樣品在無菌的條件下更換合適的緩沖液及使質(zhì)粒DNA濃度濃縮到符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化工藝，屬于生物制藥領(lǐng)域。通過對堿裂解后的產(chǎn)品進(jìn)行超濾、離子交換層析、疏水層析、分子篩層析、除菌過濾、無菌濃縮最終得到符合藥用濃度的質(zhì)粒DNA。本發(fā)明純化的質(zhì)粒DNA總回收率可達(dá)到50％以上，其產(chǎn)品各項(xiàng)檢定項(xiàng)目均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。 |
| 國際公布 |
