公開(公告)號
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CN1876820A
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公開(公告)日
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2006.12.13
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申請(專利)號
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CN200610016880.7
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申請日期
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2006.05.26
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專利名稱
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一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化方法
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主分類號
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C12N15/85(2006.01)I
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分類號
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C12N15/85(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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吉林大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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孔 維;殷玉和;孫 博
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地址
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130012吉林省長春市前衛(wèi)路10號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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魏征驥
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國省代碼
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吉林;22
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主權(quán)項(xiàng)
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一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化方法,包括以下步驟: 一、在含有5-20kb質(zhì)粒DNA的裂解液中,加入氯化鈣或硫酸銨溶液,使終濃度為0.2-2M/L鹽析沉淀,過孔徑1.0um濾膜得到澄清的裂解液; 二、使含有質(zhì)粒DNA的裂解液經(jīng)過超濾裝置而過濾,截留分子量100-750KD之間,除去大部分RNA,并通過合適的透濾液進(jìn)行透濾; 三、將超濾獲得的濃縮裂解液上樣到離子交換層析介質(zhì)柱子后,經(jīng)過濃度為0.1-0.5M的氯化鈉洗脫液洗去雜質(zhì),用濃度為0.5-1M的氯化鈉洗脫液洗脫后,得到含行質(zhì)粒DNA的洗脫液; 四、將步驟三中得到的含有質(zhì)粒DNA的洗脫液,用硫酸銨調(diào)節(jié)電導(dǎo)率為100-300ms/cm,上樣到預(yù)先平衡好的疏水層析介質(zhì)柱子后收集流穿峰; 五、將疏水流穿峰樣品上樣到分子篩層析介質(zhì)柱子,收集第一個峰; 六、將步驟五得到的分子篩樣品,經(jīng)過過濾器和超濾器聯(lián)動裝置使樣品在無菌的條件下更換合適的緩沖液及使質(zhì)粒DNA濃度濃縮到符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種適用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA的純化工藝,屬于生物制藥領(lǐng)域。通過對堿裂解后的產(chǎn)品進(jìn)行超濾、離子交換層析、疏水層析、分子篩層析、除菌過濾、無菌濃縮最終得到符合藥用濃度的質(zhì)粒DNA。本發(fā)明純化的質(zhì)粒DNA總回收率可達(dá)到50%以上,其產(chǎn)品各項(xiàng)檢定項(xiàng)目均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。
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國際公布
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