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腫瘤特異性抗原TA48及其在癌癥診斷中的應(yīng)用

公開(公告)號(hào) CN1273486C  
公開(公告)日 2006.09.06  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410021844.0  
申請(qǐng)日期 2004.02.17  
專利名稱 腫瘤特異性抗原TA48及其在癌癥診斷中的應(yīng)用  
主分類號(hào) C07K14/435(2006.01)I  
分類號(hào) C07K14/435(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I;G01N33/574(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 葉尚勉;葉尚蓉  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 葉尚勉;葉尚蓉  
地址 610016四川省成都市梓橦街42號(hào)3單元7號(hào)  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 成都虹橋?qū)@聞?wù)所  
代理人 李高峽  
國省代碼 四川;51  
主權(quán)項(xiàng) 一種腫瘤特異性抗原,其特征在于它由以下方法制備: a)將癌細(xì)胞系或腫瘤組織進(jìn)行細(xì)胞裂解并勻漿,離心取上清液;所述癌細(xì)胞系為乳腺癌細(xì)胞株MCF-7;所述細(xì)胞裂解和勻漿在0.5%NP40,0.15MNaCl,5mMEDTA,50mMTris,1mMPMSF溶液中進(jìn)行,12000rpm離心30分鐘; b)將獲得的上清液經(jīng)離子交換層析柱分離,梯度洗脫并分步收集洗脫的蛋白部分;所述離子交換層析柱的離子交換試劑為陽離子瓊脂糖SEPHAROSE,層析柱大小為2.5×11cm,所述離子交換試劑體積2毫升;用20ml0.05MPBSPH=7離子交換緩沖液進(jìn)行柱平衡;再將細(xì)胞裂解上清液或組織勻漿上清液上柱后,室溫下用離子交換緩沖液梯度洗脫,洗脫液用分步收集儀收集,每步洗脫液的容積為所述離子交換試劑的10倍,所有的操作均在室溫下進(jìn)行;所述每步梯度洗脫液組成為: 1).0.005MPBS(pH=7) 2).0.028M磷酸二氫鈉溶液 3).0.05M磷酸二氫鈉溶液 4).0.175M磷酸二氫鈉溶液 5).0.3M磷酸二氫鈉溶液 6).1.0M磷酸二氫鈉溶液 7).1.0M磷酸溶液 在分步收集中每1ml分部收集洗脫液; c)將分步收集的每一分部的洗脫液與癌癥病人的血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng),確定反應(yīng)呈陽性的分部,存在于第7步洗脫液的69至71段收集液; d)將c)步驟中獲得的收集液進(jìn)行進(jìn)一步純化和鑒定,獲得腫瘤特異性抗原。  
摘要 本發(fā)明涉及一種新的腫瘤特異性抗原TA48,采用液相層析分離法結(jié)合癌癥血清學(xué)的抗體捕獲酶聯(lián)免疫測(cè)定方法,從癌細(xì)胞系和腫瘤組織中分離獲得。該抗原在所有常見的癌細(xì)胞株均有表達(dá),而在相應(yīng)的正常組織則不表達(dá)或表達(dá)低下。本發(fā)明還提供一種體外早期診斷癌癥的方法。通過測(cè)定樣本中抗腫瘤特異性抗原TA48的自身抗體的量,而判斷腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后情況。該檢測(cè)方法有95%的特異性,平均67.6%的敏感性,能夠用于各種不同類型癌癥的普查?稍缙跈z測(cè)到在腫瘤的發(fā)生,并可對(duì)腫瘤的發(fā)展情況和預(yù)后作出評(píng)估。具有臨床應(yīng)用的良好前景。  
國際公布  
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