公開(公告)號
|
CN1766106A
|
公開(公告)日
|
2006.05.03
|
申請(專利)號
|
CN200510060786.7
|
申請日期
|
2005.09.15
|
專利名稱
|
腦鈉肽(BNP)制備方法
|
主分類號
|
C12N15/09(2006.01)I
|
分類號
|
C12N15/09(2006.01)I;C12N15/16(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61K38/22(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I
|
分案原申請?zhí)? |
|
優(yōu)先權
|
|
申請(專利權)人
|
浙江大學
|
發(fā)明(設計)人
|
周林福;陳 峰;朱海紅;陳 智
|
地址
|
310029浙江省杭州市西湖區(qū)延安路浙大湖濱校區(qū)醫(yī)學院
|
頒證日
|
|
國際申請
|
|
進入國家日期
|
|
專利代理機構
|
杭州中成專利事務所有限公司
|
代理人
|
馮子玲
|
國省代碼
|
浙江;33
|
主權項
|
腦鈉肽(BNP)的制備方法,其特征在于以下步驟: (1)采用PCR技術將表達BNP的目的基因擴增,并純化其產(chǎn)物; (2)將純化的PCR產(chǎn)物于BamHI與HindIII雙酶切后定向插入經(jīng)同樣雙酶切的pet32a,獲得重組質粒Pet32a+BNP; (3)將重組質粒Pet32a+BNP轉化至大腸桿菌DH5a,經(jīng)培養(yǎng)擴增,抽提純化,測序分析,獲測序正確的重組質粒; (4)將測序正確的重組質粒轉化至BL21DE30菌,在30℃,0.1mMIPTG條件下表達重組蛋白; (5)將表達重組蛋白的活化菌株接種到2-YT培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng),進行搖瓶實驗,工程菌在發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵,種子菌按5%比例接種,在低溶氧條件下誘導,放罐,離心得菌體; (6)將離心得到的菌體沉淀進行細胞裂解,洗滌出包涵體,溶解包涵體,His柱過柱純化。
|
摘要
|
本發(fā)明公開了一種腦鈉肽(BNP)的制備方法,為克服傳統(tǒng)提取BNP方法成本高、收率低,目的蛋白容易變性,材料來源有限等諸多缺陷,本發(fā)明在制備BNP過程中,用PCR技術擴增目的基因,以Pet32a作為載體質粒,酶切定向插入BNP目的基因后形成重組質粒,以大腸桿菌DH5α,BL21(DE3)作為表達菌株,以His柱作為純化柱子分離純化目的蛋白。這種制備方法既可方便檢測,又可增強重組蛋白的穩(wěn)定性。運用本發(fā)明技術獲得的BNP通過免疫學方法制成診斷試劑盒,可快速、準確、特異地診斷和鑒別診斷許多心血管疾病。
|
國際公布
|
|