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一種利用大腸桿菌生產(chǎn)人α防御素1蛋白的方法

公開(公告)號 CN1810954A  
公開(公告)日 2006.08.02  
申請(專利)號 CN200510112983.9  
申請日期 2005.10.18  
專利名稱 一種利用大腸桿菌生產(chǎn)人α防御素1蛋白的方法  
主分類號 C12N1/21(2006.01)I  
分類號 C12N1/21(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 甘肅亞盛鹽化工業(yè)集團有限責(zé)任公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 周長生;陳其新;李春麗;陳正華  
地址 730030甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)張掖路219號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 甘肅省專利服務(wù)中心  
代理人 田玉蘭;程 萍  
國省代碼 甘肅;62  
主權(quán)項 一種利用大腸桿菌生產(chǎn)人α防御素1蛋白的方法,包括以下步驟: (1)使用SEQIDNO1所示的序列片段 1ATGGCCTGCTATTGCCGTATTCCAGCCTGC 31ATTGCAGGCGAACGTCGTTATGGCACCTGC 61ATCTACCAGGGCCGTCTCTGGGCATTCTGC 91TGCTGATAAG 下劃線為起始密碼子或雙終止密碼子及側(cè)翼序列 (2)將上述基因序列插入T7型Trx融合表達載體中,獲得重組質(zhì)粒pET32a-mHNP1。 (3)將pET32a-mHNP1導(dǎo)入匹配大腸桿菌中組成完整表達體系; (4)用異丙基硫代-β-D半乳糖糖苷誘導(dǎo)上述體系在菌體內(nèi)表達人HNP1成熟蛋白。  
摘要 本發(fā)明提供了一種利用大腸桿菌生產(chǎn)生物活性物質(zhì)人α防御素1蛋白的方法及其適用的優(yōu)化設(shè)計DNA序列和重組表達質(zhì)粒。包括:使用由人α防御素1成熟肽編碼序列優(yōu)化設(shè)計后獲得的序列SEQ ID NO:1,構(gòu)建成原核表達載體質(zhì)粒pET32a-mHNP1,將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)pLysS,化學(xué)誘導(dǎo)表達人α-防御素1。本法可克服因α防御素1蛋白對宿主菌本身的毒害作用而引起的低表達甚至不表達,大量生產(chǎn)有活性的人α防御素1蛋白,滿足有關(guān)結(jié)構(gòu)、生化性質(zhì)研究及抗體制備等方面的需要,也可應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。  
國際公布  
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