| 公開(公告)號 | CN1810957A |
| 公開(公告)日 | 2006.08.02 |
| 申請(專利)號 | CN200510041961.8 |
| 申請日期 | 2005.04.19 |
| 專利名稱 | 一種永生化人骨髓基質干細胞系及其建立方法 |
| 主分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 胡蘊玉;滕 勇;白建萍;呂 榮;李 丹 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長樂西路17號第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院骨科研究所 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 西安慈源有限責任專利事務所 |
| 代理人 | 鮑燕平 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權項 | 一種永生化人骨髓基質干細胞系及其建立方法，原代人骨髓基質干細胞來源于正常流產胎兒骨髓組織，其特征在于，該永生化人骨髓基質干細胞系體外培養(yǎng)能無限克隆增殖、且具有多向分化潛能；具體包括： 1)形態(tài)特征H.E染色，永生化人骨髓基質干細胞完全貼壁后呈纖維樣或多角型，核多為圓形，細胞核質比大，線粒體、內質網等細胞器發(fā)達，屬生長旺盛的成纖維樣細胞； 2)生長特性細胞數(shù)較少時，可見典型的單克隆生長方式；當細胞生長至75％融合時，呈纖維樣，生長曲線表明，細胞接種1～2天生長緩慢，3～5天進入對數(shù)生長期，細胞倍增時間為40.08小時，從細胞生長曲線及1年以上擴增細胞生長情況看，該細胞系為永生化人骨髓基質干細胞系； 3)流式細胞分析特征永生化人骨髓基質干細胞表達CD29，CD44，CD106，不表達CD34，CD45，CD14，HLA-DR分子，從細胞表面分子標志證實本研究獲得的永生化人骨髓基質干細胞系并非造血系細胞； 4)染色體核型分析傳至112代的人骨髓基質干細胞染色體數(shù)目為2n＝46，其中，中部著絲粒染色體有5對，臂比值為1.33±0.02～1.07±0.03；亞中部著絲粒染色體有7對，臂比值為3.18±0.03～1.45±0.07；端部著絲粒染色體有6對，小染色體有4對，性染色體1對，染色體核型正常； 5)生物學特征體外連續(xù)培養(yǎng)過程中，永生化人骨髓基質干細胞具有克隆形成能力，無裸鼠致瘤性，在軟瓊脂內不能生長，血清依賴性無顯著降低，仍具有接觸抑制性，不具備轉化細胞或癌細胞的特征，是正常細胞； 6)成體干細胞特征永生化人骨髓基質干細胞可以定向誘導分化為成骨、軟骨以及心肌樣細胞，具備成體干細胞的特性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于一種永生化人骨髓基質干細胞系及其建立方法，原代人骨髓基質干細胞來源于正常流產胎兒骨髓組織，有限稀釋法進行單細胞克隆培養(yǎng)純化原代細胞，通過轉染pCIneo-hTERT基因獲得永生化。該人骨髓基質干細胞系體外培養(yǎng)能無限克隆增殖，但不具備轉化細胞或癌細胞的特征，在細胞生物學特征上是正常細胞；細胞可以定向誘導分化為成骨、軟骨以及心肌樣細胞，具有多向分化潛能，仍具備成體干細胞的特性�？梢栽谏锕こ填I域得到應用。這種永生化人骨髓基質干細胞系及其建立方法，為研究人骨髓基質干細胞的生物學行為提供標準細胞系，為組織工程基礎研究提供平臺，為臨床應用提供足量種子細胞，并為建立人骨髓基質干細胞系提供一種有效、可靠的方法。 |
| 國際公布 |
