公開(公告)號
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CN1289692C
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公開(公告)日
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2006.12.13
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申請(專利)號
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CN200410047959.7
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申請日期
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2004.06.14
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專利名稱
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SARS冠狀病毒RNA磁性捕獲方法及應(yīng)用該方法的PCR檢測
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主分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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蔡劍平
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發(fā)明(設(shè)計)人
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蔡劍平;黑愛蓮
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地址
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100054北京市豐臺區(qū)草橋東路16-4022
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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北京德琦知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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王 琦;宋志強
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項
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一種SARS冠狀病毒RNA的捕獲方法,該方法包括如下的步驟:1)清洗表面包被有親和素的磁珠,以清除RNA酶,防止RNA的降解;2)將捕獲探針P1在5’端用生物素進行標(biāo)記;3)將清洗過的磁珠與適量經(jīng)標(biāo)記的捕獲探針P1混合,通過生物素和親和素的特異結(jié)合,使捕獲探針P1包被在磁珠表面,4℃保存;4)將標(biāo)本用TRIzol LS裂解;5)向步驟4)所得溶液中加入包被有捕獲探針P1的磁珠,使捕獲探針P1捕獲SARS冠狀病毒RNA;和6)用磁力架收集經(jīng)步驟5)的溶液中的磁珠,洗滌后,將其溶于適量的DEPC水中,-80℃保存;其中捕獲探針P1的序列為:5′-GTAGCCTGGTTAATGTGC-3’;所述標(biāo)本選自患者的血清、血漿、唾液、尿液、腦脊液或呼吸道分泌物中的一種。
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摘要
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本發(fā)明提供了一種SARS冠狀病毒RNA的捕獲方法。具體的是使用生物素標(biāo)記的捕獲探針與包被了親和素的磁珠結(jié)合,通過捕獲探針捕獲標(biāo)本中的靶RNA,再用磁力架收集,并洗滌。該捕獲方法可去除標(biāo)本中的蛋白質(zhì)、非靶RNA和抑制PCR的物質(zhì),使靶RNA得到純化;該方法可同時對靶RNA進行濃縮富集,起到提高靶RNA濃度的目的。此外,本發(fā)明還提供了一種雙探針捕獲方法。在用捕獲探針捕獲靶RNA前,用預(yù)雜交探針與樣本中的靶RNA進行預(yù)雜交,打開靶RNA的二級結(jié)構(gòu),進一步提高捕獲效率。本發(fā)明還提供了一種SARS冠狀病毒RNA的RT-PCR檢測方法,該方法采用上述捕獲方法捕獲靶RNA,可大大提高檢測的敏感度,有利于對患者進行早期診斷。
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國際公布
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