| 公開(公告)號 | CN1259063C |
| 公開(公告)日 | 2006.06.14 |
| 申請(專利)號 | CN03132902.0 |
| 申請日期 | 2003.07.17 |
| 專利名稱 | 非特異免疫激活劑的制備方法 |
| 主分類號 | A61K35/74(2006.01)I |
| 分類號 | A61K35/74(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A23K1/16(2006.01)I;C12P1/04(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | 2003.7.9 CN 03138801.9 |
| 申請(專利權)人 | 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所 |
| 發(fā)明(設計)人 | 王秀華;黃 倢;宋曉玲;楊 冰;劉 莉 |
| 地址 | 266071山東省青島市南京路106號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 青島海昊知識產(chǎn)權事務所有限公司 |
| 代理人 | 韓振東 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權項 | 一種非特異免疫激活劑的制備方法，包括經(jīng)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)，再從發(fā)酵液中分離收集菌體，獲取菌體細胞壁中的活性非特異免疫激活制劑的過程，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)的菌種是雙歧桿菌DSM20210，或雙歧桿菌ATCC25866，或雙歧桿菌ATCC25867，或雙歧桿菌ATCC25525；所述獲取菌體細胞壁中的活性非特異免疫激活制劑的過程是：(1).收集菌體：取發(fā)酵完成的菌液，經(jīng)4000-8000g、4℃的離心處理20-30分鐘，棄去上清液，保留收集的該菌體沉淀，再用0.8％生理鹽水洗滌至該菌體為白色；(2).裂解細胞：按1∶4的g/ml比例，將白色的該菌體與細胞裂解劑混合，并置入95℃水浴中，恒溫處理且連續(xù)攪拌1小時，再立即冷卻至室溫，并用雙蒸水徹底洗滌；(3).四次洗滌離心除去裂解劑：用濃度梯度的甲醇水溶液對經(jīng)(2).步處理的菌體，分別進行三次洗滌、離心處理，其中離心是以5000-6000g，分步按濃度梯度洗滌處理，其梯度濃度為30％、70％、100％，或為20％、60％、100％；之后用丙酮洗滌，且經(jīng)4000-5000g的離心處理，再將收集的該菌體沉淀進行0～4℃的低溫干燥處理；(4).水解預處理：將(3).中得到的干燥產(chǎn)物，按每500g該產(chǎn)物加1L的pH6.2磷酸鹽緩沖液和0.3gEDTA液的比例，配制混合液，保持恒溫80℃達4小時，再冷卻至37℃；(5).酶解處理：向(4).中冷卻的混合液中加入適量1-5g/L的溶菌酶，保持恒溫37℃下作用24小時；之后補加1-3g/L的溶菌酶，37℃下處理12小時；(6).再次酶解處理：用適量2-5g/L的或是木瓜蛋白酶，或是鏈霉蛋白酶的蛋白酶，加入到溶菌的該混合液中，在50℃溫度下處理24小時，即得到含有效活性濃度為0.4-0.8％的寡糖肽類和含有丙氨酸∶谷氨酸∶賴氨酸∶甘氨酸的摩爾數(shù)比＝3∶1∶1∶1的組合物，該組合物是具有淡甜香氣味的黃褐色液體——非特異免疫激活劑主料制劑；或將該黃褐色液體干燥處理，即得到性狀具有特殊甜香氣味的，深褐色的粘稠物——含有效濃度為4-8％的寡糖肽類活性成分的和含有丙氨酸∶谷氨酸∶賴氨酸∶甘氨酸的摩爾數(shù)比＝3∶1∶1∶1的組合物——非特異免疫激活劑粗品制劑。 |
| 摘要 | 一種非特異免疫激活劑的制備方法，包括經(jīng)厭氧發(fā)酵，從發(fā)酵液中分離菌體，獲取菌體細胞壁中的非特異免疫激活制劑的過程。該發(fā)酵菌種是雙歧桿菌DSM 20210，或雙歧桿菌ATCC25866，或雙歧桿菌ATCC25867，或雙歧桿菌ATCC25525。獲取該制劑的過程：(1)收集菌體；(2)裂解細胞；(3)四次洗滌離心除去裂解劑；(4)水解預處理；(5)酶解處理；(6)再次酶解處理；從而制成非特異免疫激活劑主料制劑或粗料制劑作為魚、蝦、貝類的飼料添加劑，用于激活養(yǎng)殖生物的非特異免疫力，達到促進對魚、蝦、貝類的抗病原生物的能力，促進魚、蝦、貝類的生長發(fā)育，提高了飼料轉化率及水生養(yǎng)殖動物育苗期成活率。該激活劑干粉制劑作為水生脊椎動物注射用激活劑，可增強魚類頭腎細胞吞噬活力，增加抗病力。 |
| 國際公布 |
