公開(公告)號
|
CN1221285C
|
公開(公告)日
|
2005.10.05
|
申請(專利)號
|
CN03134626.X
|
申請日期
|
2003.09.28
|
專利名稱
|
肝癌,胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法
|
主分類號
|
A61K39/00
|
分類號
|
A61K39/00;A61K39/39;A61K48/00;A61K9/127;A61K9/107;A61P35/00;C12N15/62
|
分案原申請?zhí)? |
|
優(yōu)先權(quán)
|
|
申請(專利權(quán))人
|
中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
|
發(fā)明(設(shè)計)人
|
隋延仿;葉菁;吳道澄;李增山;;孫玉靜;陳廣生;曲萍
|
地址
|
710032 陜西省西安市長樂西路17號
|
頒證日
|
|
國際申請
|
|
進入國家日期
|
|
專利代理機構(gòu)
|
西安通大專利代理有限責(zé)任公司
|
代理人
|
李鄭建
|
國省代碼
|
陜西;61
|
主權(quán)項
|
一種肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:1)將腫瘤特異性抗原MAGE-1基因與生物免疫佐劑結(jié)核桿菌熱休克蛋白70即Hsp70基因連接,構(gòu)成MAGE-1~Hsp70融合基因,通過大腸桿菌進行原核表達(dá),獲得MAGE-1~Hsp70融合蛋白;2)上述MAGE-1~Hsp70融合蛋白表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)6M尿素變性,SephadexG-25凝膠色譜柱復(fù)性后,再通過Ni2+-NTAAgarose親和色譜和ATP-Sepherose4B親和色譜進行分離與純化,得到有活性的MAGE-1~Hsp70融合蛋白;3)將有活性的MAGE-1~Hsp70融合蛋白與超抗原葡萄球菌腸毒素A以摩爾數(shù)比為1000∶1組合,構(gòu)成復(fù)合抗原物;4)采用卵磷脂和膽固醇,通過超聲技術(shù)制備納米脂質(zhì)體,包裹復(fù)合抗原物;5)最后,通過N-羥基琥珀亞胺酯與Hsp70分子連接,形成N-Hsp70,將N-Hsp70與納米脂質(zhì)體混合,N-Hsp70插入納米脂質(zhì)體磷脂膜外層,構(gòu)成肝癌、胃癌和乳腺癌基因工程納米疫苗。
|
摘要
|
本發(fā)明涉及肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法,采用腫瘤特異性共有抗原基因黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)和生物免疫佐劑熱休克蛋白70(Hsp70)基因連接,構(gòu)成融合基因(MAGE-1~Hsp70),通過大腸桿菌表達(dá),分離與純化,獲得MAGE-1~Hsp70融合蛋白,經(jīng)變性與復(fù)性,得到高活性的融合蛋白,將此融合蛋白與超抗原葡萄球菌腸毒素A組合,構(gòu)成復(fù)合抗原物。制備納米脂質(zhì)體,包裹復(fù)合抗原物,通過N-羥基琥珀酰亞胺酯與Hsp70分子連接,形成N-Hsp70,將其插入納米脂質(zhì)體磷脂膜外層,構(gòu)成肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗。采用本發(fā)明制備的基因工程納米疫苗有以下優(yōu)點:1)采用皮下注射,使用簡便、安全;2)抗瘤廣譜;3)具有靶向性;4)殺瘤效果強。
|
國際公布
|
|