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兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法

公開(公告)號 CN1219071C  
公開(公告)日 2005.09.14  
申請(專利)號 CN03129701.3  
申請日期 2003.05.12  
專利名稱 兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法  
主分類號 C12P19/12  
分類號 C12P19/12;//(C12P19/12,C12R1:85)  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 天津科技大學  
發(fā)明(設計)人 肖冬光;趙華;王蘭;李于;;郭波  
地址 300222 天津市河西區(qū)大沽南路1038號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 天津市三利專利商標代理有限公司  
代理人 劉莎莉  
國省代碼 天津;12  
主權項 一種兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法,通常它包括:菌體培養(yǎng)、海藻糖的合成、海藻糖的提取、分離、純化、濃縮、結晶、干燥,其特征在于:采用兩步發(fā)酵法利用酵母細胞中的海藻糖合成酶系合成胞外海藻糖,同時鈍化酵母的海藻糖分解酶活性,并用混合床離子交換系統(tǒng)分離純化海藻糖,其具體方法如下:(1)應激態(tài)酵母細胞培養(yǎng):同時采用氮饑餓、熱休克和滲透脅迫三種方法,誘導酵母細胞產(chǎn)生較多的應激酶——海藻糖合成酶系,脅迫生長型酵母細胞向應激態(tài)酵母細胞的轉(zhuǎn)變;(2)胞外海藻糖的合成:首先采用物理或化學的方法,其中物理方法為加熱處理法,化學的方法為甲苯處理法,對應激態(tài)酵母細胞進行休克處理;然后采用海藻糖合成培養(yǎng)基進行胞外海藻糖的合成;搖瓶試驗為500mL三角瓶,裝液量60~120mL,轉(zhuǎn)速100~180r/min;發(fā)酵罐試驗采用5L自控罐以流加葡萄糖的方式進行胞外海藻糖合成,其生產(chǎn)工藝是:初始裝液量2.5L,初始糖濃度為1~2%,pH4.0~7.0,溶10%~40%,合成溫度40~48℃;反應過程中用10%Na2CO3調(diào)節(jié)pH,并可根據(jù)消耗的糖量補加葡萄糖液,最終反應液量為3L,上述的加熱處理法是:在35~43℃振蕩培養(yǎng)1h后,升溫至45~65℃處理1h,甲苯處理法是:按每克酵母泥加入2~10%甲苯5mL,30~40℃處理1h;(3)海藻糖的分離與純化:將反應液離心除酵母細胞,取上清液高溫滅菌,用截留分子量為10000的中空纖維超濾裝置過濾除大分子物質(zhì);隨后采用混合床離子交換柱分離海藻糖和葡萄糖。  
摘要 本發(fā)明涉及一種以葡萄糖為基質(zhì)兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法,第一步為應激態(tài)酵母細胞的培養(yǎng),采用現(xiàn)有技術的氮饑餓、熱休克、滲透脅迫等方法,誘導酵母細胞產(chǎn)生較多的應激酶——海藻糖合成酶系;第二步為應激代謝產(chǎn)物海藻糖的合成,采用物理或化學的方法對應激態(tài)酵母細胞進行休克處理,打破酵母細胞膜對海藻糖滲透性的限制,利用酵母細胞中的海藻糖合成酶系大量合成胞外海藻糖。該方法產(chǎn)量高、生產(chǎn)工藝簡單、設備投資少、生產(chǎn)成本低,其產(chǎn)品海藻糖對生物大分子具有良好的非特異性保護作用,可廣泛應用于分子生物學、醫(yī)藥生物制品、食品及化妝品等領域。  
國際公布  
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