| 公開(公告)號(hào) | CN1632107A |
| 公開(公告)日 | 2005.06.29 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410084625.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.11.26 |
| 專利名稱 | 生物人工肝用豬和人肝細(xì)胞的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/06 |
| 分類號(hào) | C12N5/06;C12N5/08 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 李蘭娟;李君 |
| 地址 | 310006浙江省杭州延安路浙大湖濱校區(qū) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 馮子玲 |
| 國(guó)省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 生物人工肝用豬和人肝細(xì)胞的制備方法，主要包括肝臟的體外灌流，肝細(xì)胞洗滌二個(gè)過程，其特征在于：所述肝臟的體外灌流采用下述(1)-(4)四步灌流過程：(1)在常溫條件下用含EDTA的灌流液PBE按所用肝臟重量的4-5倍量灌注，采用尖細(xì)滴管經(jīng)蠕動(dòng)泵灌流3-5分鐘，然后用預(yù)先加熱至39℃的含EDTA的灌流液PBE，采用按所用肝臟重量的8-10倍量繼續(xù)灌流5-10分鐘；(2)用不含EDTA的灌流液PB按所用肝臟重量的5-7倍量灌注3-5分鐘，然后將肝臟轉(zhuǎn)移至新的無菌盆中；(3)將預(yù)熱至39℃的含Dispase的灌流液PBD，按按所用肝臟重量的5-7倍量繼續(xù)灌流5-8分鐘后，棄去半量的含Dispase的灌流液；(4)將預(yù)熱至39℃的含膠原酶和氯化鈣的灌流液PBC，按所用肝臟重量的5-7倍量繼續(xù)灌流5-8分鐘，然后繼續(xù)用灌流液PBD與PBC混合重復(fù)循環(huán)灌流5-8分鐘，直至肝包膜與肝細(xì)胞分離，用手術(shù)刀片切開肝包膜、分離未消化的肝組織和結(jié)締組織，收集肝細(xì)胞懸液。 |
| 摘要 | 生物人工肝用豬和人肝細(xì)胞的制備方法，該方法包括了分離肝細(xì)胞的體外灌流和肝細(xì)胞洗滌兩個(gè)過程，在現(xiàn)有二步灌流法的基礎(chǔ)上采用了四步灌流的方法，并設(shè)計(jì)了四步灌流的有關(guān)試劑，該發(fā)明有效提高了分離肝細(xì)胞的數(shù)量、活率和純度，方法適用于以外科方法獲取的正常豬、或狗、或成人肝移植供肝、或合法引產(chǎn)來源人胚胎肝臟的肝細(xì)胞分離，制備的肝細(xì)胞可廣泛用于肝細(xì)胞研究、肝細(xì)胞移植、生物型人工肝和混合型人工肝等。 |
| 國(guó)際公布 |
