| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1629304A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.06.22 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200310116861.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.12.02 |
| 專利名稱 | 中國(guó)漢族人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因重組、表達(dá)、純化及其醫(yī)學(xué)應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C12P19/34 |
| 分類號(hào) | C12P19/34;C12N15/12;G01N33/574;C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 胡敬群;蔡建強(qiáng);趙平 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 胡敬群;楊建國(guó) |
| 地址 | 100021北京市朝陽(yáng)區(qū)潘家園南里17號(hào)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種表達(dá)純化人VEGF基因和重組VEGF的方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)克隆人VEGF的基因，用反轉(zhuǎn)錄PCR法擴(kuò)增VEGF的基因；(2)將上述擴(kuò)增的VEGF基因與克隆載體連接，構(gòu)建人VEGF克隆質(zhì)粒；(3)將上述人VEGF克隆質(zhì)粒亞克隆進(jìn)表達(dá)載體，再將連接后的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染大腸桿菌；(4)表達(dá)人VEGFa、將上述帶有人VEGF基因的表達(dá)載體的大腸桿菌鋪含有抗生素的LB培養(yǎng)基板，將板放置37℃溫箱過(guò)夜培養(yǎng)；b、從板上選一個(gè)菌落，接種LB培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃搖箱內(nèi)培養(yǎng)，測(cè)菌液A650OD值為0.6-0.8時(shí)停止培養(yǎng)；c、向菌液內(nèi)加IPTG，使其終濃度為0.5mM，繼續(xù)培養(yǎng)6-8小時(shí)；d、收獲細(xì)菌；(5)純化人VEGF蛋白。a、將上述細(xì)菌沉淀用pH8.0的磷酸鹽緩沖液洗一次，離心后，再用pH8.0的磷酸鹽緩沖液懸浮沉淀；b、超聲裂解細(xì)菌，離心，將沉淀加8M尿素懸浮，離心，取上清液；c、純化人用離子交換和Ni-NTG-His柱親和層析進(jìn)行純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)基因的克隆、重組、表達(dá)、純化方法與專用引物，以及VEGF蛋白及其類似物、衍生物在肝癌臨床診斷和治療方面的應(yīng)用。本方法將獲得的中國(guó)漢族人肝癌組織RNA，用PCR方法獲得人VEGF基因，并將該基因重組后克隆到大腸桿菌表達(dá)載體中，誘導(dǎo)表達(dá)后提取VEGF蛋白，進(jìn)而應(yīng)用親和層析方法得到高純度的蛋白，為臨床進(jìn)一步觀察腫瘤病人體內(nèi)VEGF水平的變化，奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。 |
| 國(guó)際公布 |
