| 公開(公告)號 | CN1596268A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.16 |
| 申請(專利)號 | CN02823601.7 |
| 申請日期 | 2002.11.26 |
| 專利名稱 | 重組人紅細(xì)胞生成素的層析純化 |
| 主分類號 | C07K14/505 |
| 分類號 | C07K14/505 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2001.11.28 US 60/333,839 |
| 申請(專利權(quán))人 | 桑多斯有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | P·埃利格爾;N·帕爾馬 |
| 地址 | 奧地利昆德 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | PCT/EP2002/013299 2002.11.26 |
| 進(jìn)入國家日期 | 2004.05.27 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京市中咨律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 黃革生;林柏楠 |
| 國省代碼 | 奧地利;AT |
| 主權(quán)項 | 一種從包含宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基回收和純化重組人紅細(xì)胞生成素(rhEpo)的方法，該方法包括步驟：(a)通過進(jìn)行選自(i)離心后深度過濾，(ii)深度過濾，和(iii)離心的方法，從細(xì)胞培養(yǎng)基除去宿主細(xì)胞、細(xì)胞成分和碎片以獲得澄清的培養(yǎng)基上清液；(b)調(diào)節(jié)上清液的電導(dǎo)率到5mS/cm或以下，并調(diào)節(jié)pH至約7.0到8.0之間；(c)將步驟(b)得到的上清液加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，從柱上洗脫rhEpo，收集含有rhEpo的峰級分；(d)利用可在中等壓力(＜10bar)下運(yùn)行并且可以抵抗高濃度NaOH的樹脂，將來自步驟(c)的合并的峰級分進(jìn)行反相層析步驟，利用有機(jī)溶劑的線性梯度洗脫rhEpo；(e)將步驟(d)中洗脫的一個或多個含有rhEpo的級分加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，利用線性鹽梯度洗脫rhEpo；(f)根據(jù)rhEpo的唾液酸化程度，選擇步驟(e)中洗脫的一個或多個含有rhEpo的級分；和(g)利用凝膠過濾介質(zhì)，將一個或多個步驟(f)中洗脫的含有rhEpo的級分進(jìn)行一個或多個大小排阻層析步驟以除去潛在的二聚體和更高的聚集體；收集含有rhEpo的洗脫物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種從包含宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基回收和純化重組人紅細(xì)胞生成素(rhEpo)的方法，該方法包括步驟：(a)通過利用盤疊式分離器離心，接著深度過濾步驟，從細(xì)胞培養(yǎng)基除去宿主細(xì)胞、細(xì)胞成分和碎片以獲得澄清的培養(yǎng)基上清液；(b)調(diào)節(jié)上清液的電導(dǎo)率到5mS/cm或以下，而調(diào)節(jié)pH至約7.0到8.0之間；(c)將步驟(b)得到的上清液加到包含陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，從柱上洗脫rhEpo，收集含有rhEpo的峰級分；(d)利用可以在中等壓力(＜10bar)下運(yùn)行并且可以抵抗高濃度NaOH的聚苯乙烯樹脂，如Source 30 RPC，將步驟(c)得到的合并的峰級分進(jìn)行反相層析步驟，利用有機(jī)溶劑的線性梯度洗脫rhEpo；(e)將步驟(d)中洗脫的一個或多個含有rhEpo的級分加到包含Q-Seph HP陰離子交換層析介質(zhì)的柱上，洗柱子，利用線性鹽梯度洗脫rhEpo；(f)根據(jù)rhEpo的唾液酸化程度，選擇一個或多個步驟(e)中洗脫的含有rhEpo的級分；和(g)利用Superdex 75 prep grade，將一個或多個步驟(f)中洗脫的含有rhEpo的級分進(jìn)行一個或多個大小排阻層析步驟以除去潛在的二聚體和更高的聚集體；收集含有rhEpo的洗脫物。 |
| 國際公布 | WO2003/045996 英 2003.6.5 |
