公開(公告)號
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CN1590560A
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公開(公告)日
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2005.03.09
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申請(專利)號
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CN03152882.1
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申請日期
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2003.09.01
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專利名稱
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一種從復(fù)雜組分物質(zhì)如中藥和化學(xué)混合物中高通量篩選、捕獲和分離目標(biāo)分子的方法
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主分類號
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C12Q1/68
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分類號
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C12Q1/68
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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王進(jìn)科;李同祥;陸祖宏
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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王進(jìn)科;陸祖宏;李同祥
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地址
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210096江蘇省南京市四牌樓2號東南大學(xué)吳健雄實(shí)驗(yàn)室
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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江蘇;32
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主權(quán)項(xiàng)
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一種從復(fù)雜組分物質(zhì)高通量篩選、捕獲和分離目標(biāo)分子的新方法,包括:(a)提供雙鏈核酸微陣列芯片,該芯片上排布大量捕獲探針,其中每個探針在芯片上有區(qū)別于其它探針的具體位置,并且每個探針上都有一獨(dú)特區(qū)域;(b)將雙鏈核酸微陣列芯片與復(fù)雜組分物質(zhì)接觸;(c)篩選鑒定那些與復(fù)雜組分物質(zhì)發(fā)生相互作用的探針;(d)用所鑒定的發(fā)生相互作用的探針制備親合介質(zhì);(e)用鑒定探針制備的親合介質(zhì)與復(fù)雜組分物質(zhì)接觸;(f)親合介質(zhì)捕獲和分離復(fù)雜組分物質(zhì)中與鑒定探針發(fā)生相互作用的目標(biāo)分子。
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摘要
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本發(fā)明提出一種從復(fù)雜組分物質(zhì)如中藥和組合化學(xué)分子及其混合物中高通量篩選、捕獲和分離目標(biāo)分子的新方法。該方法首先針對特定目標(biāo)的雙鏈核酸結(jié)合蛋白特別是序列特異性DNA結(jié)合蛋白,如轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB、核受體等,在固相支持物表面制備一種雙鏈核酸微陣列芯片,使其雙鏈核酸探針上嵌合雙鏈核酸結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn),用以高通量測定量核酸結(jié)合蛋白與雙鏈核酸微陣列芯片上各結(jié)合位點(diǎn)的親合性,建立序列核酸結(jié)合蛋白與其芯片上各核酸靶點(diǎn)的結(jié)合親合性標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)體系;再用雙鏈核酸微陣列芯片與復(fù)雜組分物質(zhì)如中藥和組合化學(xué)分子及其混合物反應(yīng),反應(yīng)后通過檢測核酸結(jié)合蛋白與其芯片上各核酸靶點(diǎn)的結(jié)合親合性變化,篩選出那些與標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)體系比較結(jié)合親合性發(fā)生改變的核酸靶點(diǎn);將其作為核酸親合介質(zhì)連接到層析柱表面,制備特異性核酸探針層析柱;再將復(fù)雜組分物質(zhì)如中藥和組合化學(xué)分子及其混合物灌柱,用核酸探針捕獲復(fù)雜組分物質(zhì)中與核酸探針特異結(jié)合的有效分子;最后經(jīng)洗脫收獲與核酸探針結(jié)合的有效分子,進(jìn)行其化學(xué)性質(zhì)、分子生物學(xué)基礎(chǔ)及藥理學(xué)研究,開發(fā)成為核酸結(jié)合蛋白的核酸靶點(diǎn)特異性候選藥物。該發(fā)明的技術(shù)及思想體系,在基礎(chǔ)分子生物學(xué)研究,特別是序列特異性DNA結(jié)合蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)基因表達(dá)調(diào)控,以及生物醫(yī)學(xué)研究,如序列特異性DNA結(jié)合蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)相關(guān)疾病藥物作用機(jī)理研究和藥物性分子篩選中有廣泛而重要的應(yīng)用價值。
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國際公布
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