公開(公告)號(hào)
|
CN1560238A
|
公開(公告)日
|
2005.01.05
|
申請(qǐng)(專利)號(hào)
|
CN200410023498.X
|
申請(qǐng)日期
|
2004.02.25
|
專利名稱
|
利用三環(huán)葵烷-9-基-二硫代碳酸酯鉀鹽誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞向神經(jīng)元分化的方法
|
主分類號(hào)
|
C12N5/08
|
分類號(hào)
|
C12N5/08
|
分案原申請(qǐng)?zhí)? |
|
優(yōu)先權(quán)
|
|
申請(qǐng)(專利權(quán))人
|
山東大學(xué)
|
發(fā)明(設(shè)計(jì))人
|
苗俊英;張尚立;王楠
|
地址
|
250100山東省濟(jì)南市歷下區(qū)山大南路27號(hào)
|
頒證日
|
|
國際申請(qǐng)
|
|
進(jìn)入國家日期
|
|
專利代理機(jī)構(gòu)
|
濟(jì)南三達(dá)專利事務(wù)所
|
代理人
|
孫君
|
國省代碼
|
山東;37
|
主權(quán)項(xiàng)
|
一種利用D609誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞向神經(jīng)元分化的方法,由以下步驟組成:1)選取處于對(duì)數(shù)生長期的血管內(nèi)皮細(xì)胞,接種于培養(yǎng)板各孔中的鋪有明膠的蓋玻片上,置于飽和濕度、5%的CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi),在含有10%小牛血清和40μg/LbFGF的M199培養(yǎng)液中培養(yǎng),至細(xì)胞生長達(dá)到蓋玻片面積的80%~90%;2)用無血清培養(yǎng)液將上述培養(yǎng)板各孔中的細(xì)胞清洗1~2次,然后對(duì)培養(yǎng)板各孔中的細(xì)胞進(jìn)行分組,確定對(duì)照組和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組,每組不少于4孔;3)對(duì)照組的血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液采用去除血清和和bFGF的M199培養(yǎng)基,誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞培養(yǎng)液除使用對(duì)照組培養(yǎng)液外還添加了濃度為5mg/L~30mg/L的D609;4)分別調(diào)整上述對(duì)照組和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)皮細(xì)胞的pH值,使pH為7.2,置于飽和濕度、5%的CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20~30分鐘;5)將步驟4)中對(duì)照組和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)皮細(xì)胞pH調(diào)為7.4-7.8,置于飽和濕度、5%的CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng),誘導(dǎo)6~11小時(shí),檢測誘導(dǎo)結(jié)果。
|
摘要
|
本發(fā)明公開了一種利用D609誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞向神經(jīng)元分化的方法,該方法由血管內(nèi)皮細(xì)胞接種培養(yǎng);無血清培養(yǎng)液清洗;對(duì)照組和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)皮細(xì)胞在pH為7.2條件下預(yù)誘導(dǎo);在濃度為5mg/L~30mg/L的D609,pH 7.4-7.8,飽和濕度、5%的CO2,37℃條件下誘導(dǎo)以及維持誘導(dǎo)等步驟組成。本發(fā)明方法證明了血管內(nèi)皮細(xì)胞也具有多分化的潛能性,這為細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化提供了新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為利用D609使其作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞分化開辟了新用途。
|
國際公布
|
|