網(wǎng)站首頁
醫(yī)師
藥師
護(hù)士
衛(wèi)生資格
高級(jí)職稱
住院醫(yī)師
畜牧獸醫(yī)
醫(yī)學(xué)考研
醫(yī)學(xué)論文
醫(yī)學(xué)會(huì)議
考試寶典
網(wǎng)校
論壇
招聘
最新更新
網(wǎng)站地圖
您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 >> 藥學(xué)理論 >> 中國(guó)藥品專利文獻(xiàn) >> 正文:非受體型酪氨酸蛋白激酶Syk的制備方法及其用途專利檢索:專利號(hào)/專利人/發(fā)明人
    

非受體型酪氨酸蛋白激酶Syk的制備方法及其用途

公開(公告)號(hào) CN1557951A  
公開(公告)日 2004.12.29  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410005171.X  
申請(qǐng)日期 2004.02.11  
專利名稱 非受體型酸蛋白激酶Syk的制備方法及其用途  
主分類號(hào) C12N9/12  
分類號(hào) C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/06;C07K16/40;A61K38/45;C12Q1/68;G01N33/53  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 單保恩  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 馬 洪;單保恩  
地址 050011河北省石家莊市健康路12號(hào)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院科研中心  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 石家莊新世紀(jì)專利事務(wù)有限公司  
代理人 董金國(guó)  
國(guó)省代碼 河北;13  
主權(quán)項(xiàng) 非受體型酪氨酸蛋白激酶Syk的制備方法,其特征在于它包括以下工藝步驟:A、細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng):Sf21細(xì)胞株應(yīng)用Grace′s培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),將細(xì)胞調(diào)整到1×109/L的密度,用培養(yǎng)瓶于恒溫?fù)u床(80-100轉(zhuǎn)/分、26-28℃進(jìn)行培養(yǎng))經(jīng)胎盼藍(lán)染色檢測(cè)活細(xì)胞百分率應(yīng)為95%-100%;B、應(yīng)用Bac-to-Bac方法進(jìn)行制備重組Syk基因的桿狀病毒;C、純化baconidSykDNA:應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)技術(shù),將轉(zhuǎn)染Syk基因的Sf21細(xì)胞于28℃培養(yǎng)4-6天,用cellfectin試劑(Gibco-BRL)進(jìn)行選擇培養(yǎng),收集細(xì)胞制備SykDNA;應(yīng)用噬菌體純化法純化病毒顆粒,經(jīng)培養(yǎng)一些孔形成噬菌斑,將這些陽性培養(yǎng)孔細(xì)胞經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)Mr為72×103蛋白條帶的存在;D、Sf21細(xì)胞的大量制備:于培養(yǎng)瓶中加入1L呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Sf21細(xì)胞懸液[(1.0-1.2)×106/mL],加入病毒貯存液(≈2.5×108pfu/mL),于恒溫?fù)u床(80-100轉(zhuǎn)/分、28℃)培養(yǎng)48小時(shí)進(jìn)行病毒感染(病毒感染率約為6)和細(xì)胞增殖;E、Syk的分離、純化:收集細(xì)胞懸液進(jìn)行低速離心,將細(xì)胞沉淀物(2.5×109)與細(xì)胞裂解液共同培養(yǎng)30分鐘,于冰浴中用超聲波破碎儀振蕩裂解3次,每次30秒,將細(xì)胞裂解液于4℃超速離心,收集上清液并過濾,將濾液加入活化的Yellow-3層析柱(2.5×10cm,Sigma),用兩倍體積的緩沖液和1倍體積的含有200mmol/LNaCl的緩沖液沖洗層析柱。Syk蛋白用3.5倍體積的含200mmol/L-1mol/LNaCl的緩沖液洗脫。  
摘要 本發(fā)明屬于基因治療領(lǐng)域,特別是指一種輔助乳腺癌診斷、治療方案制定及估計(jì)預(yù)后的相關(guān)基因--非受體型酪氨酸蛋白激酶Syk的制備方法及其用途。主要包括細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)、應(yīng)用Bac-to-Bac方法進(jìn)行制備重組Syk基因的桿狀病毒、純化baconid Syk DNA、Sf21細(xì)胞的大量制備、Syk的分離、純化等工藝步驟。利用非受體型酪氨酸蛋白激酶(Spleen tyrosine kinase)Syk制備抗Syk抗體。本發(fā)明解決了乳腺癌的早期診斷、治療方案選擇、病情復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后估價(jià)以及群體隨訪觀察和普查等方面的問題,具有工藝設(shè)計(jì)合理,可輔助乳腺癌診斷、治療方案制定及估計(jì)預(yù)后等優(yōu)點(diǎn)。  
國(guó)際公布  
...
評(píng)論加載中...
網(wǎng) 名: (必填項(xiàng))
評(píng)論內(nèi)容:
關(guān)于我們 - 聯(lián)系我們 -版權(quán)申明 -誠(chéng)聘英才 - 網(wǎng)站地圖 - 醫(yī)學(xué)論壇 - 醫(yī)學(xué)博客 - 網(wǎng)絡(luò)課程 - 幫助
醫(yī)學(xué)全在線 版權(quán)所有© CopyRight 2006-2046, MED126.COM, All Rights Reserved
浙ICP備12017320號(hào)-1
百度大聯(lián)盟認(rèn)證綠色會(huì)員可信網(wǎng)站 中網(wǎng)驗(yàn)證