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細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)新疆雪蓮總黃酮的方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1181207C  
公開(kāi)(公告)日 2004.12.22  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN01124108.X  
申請(qǐng)日期 2001.08.13  
專(zhuān)利名稱(chēng) 細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)新疆雪總黃酮的方法  
主分類(lèi)號(hào) C12P17/06  
分類(lèi)號(hào) C12P17/06;C12N5/04;A01H4/00  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 沈陽(yáng)聯(lián)美植物細(xì)胞工程有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 賈景明;張劍俠;吳立軍  
地址 110179 遼寧省沈陽(yáng)市渾南高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)21世紀(jì)大廈1709房間  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 北京太兆天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司  
代理人 張韜  
國(guó)省代碼 遼寧;21  
主權(quán)項(xiàng) 一種新疆雪蓮總黃酮的制備方法,其特征在于該方法為:以新疆雪蓮高產(chǎn)細(xì)胞株作為種子,種子的保藏號(hào)是CGMCC 0610,采用氣升式細(xì)胞反應(yīng)器作種子罐,培養(yǎng)10-15天,培養(yǎng)條件為:溫度22-26℃,光照時(shí)間為8小時(shí)/天,光照強(qiáng)度800-2000LX;以氣升式細(xì)胞反應(yīng)器作為生產(chǎn)罐;培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度24±1℃,光照8h/d,光照強(qiáng)度1000LX,培養(yǎng)時(shí)間10-15天;其培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基,并添加萘乙酸0-3.5mg/L,6-芐基嘌呤0-3.0mg/L,蔗糖1.5-2.5%,并調(diào)PH值4.5-7.5;細(xì)胞培養(yǎng)液下罐后,將雪蓮培養(yǎng)品60℃減壓干燥至恒重,研磨成粉,取粉末1.0重量份,置100體積份容器,加100體積甲醇,即其中稱(chēng)取的雪蓮培養(yǎng)品與所用甲醇的配比是1.0克雪蓮粉:100毫升甲醇,放置24小時(shí),超聲萃取40分鐘,濾過(guò),回收甲醇,殘?jiān)舆m量水3~5體積份使溶解,難溶部分超聲溶解,放冷;通過(guò)60~85目、10g、內(nèi)徑1cm、長(zhǎng)度15cm的聚酰胺層析柱,濕法裝柱;以水50體積份洗脫,棄去水液,再用50%乙醇100體積份洗脫,收集洗脫液,并定容至100體積份,搖勻,過(guò)0.45μm微孔濾膜,棄去初濾液,取續(xù)濾液,上色譜柱,以40∶60∶1.0的甲醇∶水∶冰酸為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)257nm,流量1.0ml/min,靈敏度0.02AUFS,柱溫室溫,進(jìn)樣量10μl,進(jìn)行分離,收集獲得總黃酮晶體。  
摘要 本發(fā)明提供了一種采用氣升式生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)新疆雪蓮,從培養(yǎng)液中分離提取新疆雪蓮總黃酮的方法。該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)酵的種子,再將種子轉(zhuǎn)移到20L生物反應(yīng)器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。然后對(duì)反應(yīng)器中的培養(yǎng)液進(jìn)行分離、純化獲取新疆雪蓮總黃酮7.1%,純度99%本發(fā)明方法生產(chǎn)成本低,不污染環(huán)境,達(dá)到了產(chǎn)業(yè)化水平。  
國(guó)際公布  
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