公開(公告)號
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CN1536088A
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公開(公告)日
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2004.10.13
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申請(專利)號
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CN03116325.4
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申請日期
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2003.04.11
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專利名稱
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一種多重引物的PCR方法及其反應(yīng)液和在制備檢測試劑中的應(yīng)用
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主分類號
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C12P19/34
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分類號
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C12P19/34;C12Q1/68;C12Q1/04
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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徐定邦;徐文慧
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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徐定邦;朱德芬;陳有容;徐文慧
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地址
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200071上海市永興路58弄2號603室
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種多重引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法,由2對以上引物同時(shí)針對模板DNA鏈進(jìn)行如下反應(yīng):(1)模板變性;(2)引物退火;(3)DNA聚合酶催化下延伸合成互補(bǔ)DNA鏈;(4)按步驟(1)-(3)循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng);其特征在于,模板變性溫度在前2或3個循環(huán)為92-97℃,在后續(xù)的循環(huán)中為65-87℃。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種多重引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法及其反應(yīng)液和在制備微生物檢測試劑中的應(yīng)用,特別涉及在PCR過程中采用92-97℃和65-87℃兩種變性溫度分別進(jìn)行最初2或3個循環(huán)和其他后續(xù)循環(huán),克服了現(xiàn)有的針對同一DNA鏈的多重PCR中正反引物間相互非專一性配對擴(kuò)增,形成非特異產(chǎn)物的缺陷。通過合適的產(chǎn)物設(shè)計(jì)和兩種變性溫度的設(shè)置,顯著降低了PCR前期合成的非目標(biāo)產(chǎn)物參與后續(xù)循環(huán)的可能性,適用于制備單管式多重PCR快速檢測試劑,在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、人乳頭瘤病毒等病毒各種變異株、血清型、基因型或其亞型檢測和結(jié)核桿菌等細(xì)菌耐藥基因檢測等方面有良好的應(yīng)用前景。
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國際公布
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