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新方法

公開(公告)號 CN1518599A  
公開(公告)日 2004.08.04  
申請(專利)號 CN02812556.8  
申請日期 2002.06.19  
專利名稱 新方法  
主分類號 C12N15/68  
分類號 C12N15/68  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 2001.6.21 SE 0102204-5  
申請(專利權(quán))人 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格  
發(fā)明(設計)人 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格;;法黑德·M·阿布達爾卡里姆  
地址 瑞典烏普薩拉  
頒證日  
國際申請 PCT/EP2002/006780 2002.6.19  
進入國家日期 2003.12.22  
專利代理機構(gòu) 北京市柳沈律師事務所  
代理人 巫肖南;封新琴  
國省代碼 瑞典;SE  
主權(quán)項 用于去除抗生素耐藥性和/或使質(zhì)粒穩(wěn)定的方法,包括如下步驟:a)構(gòu)建含有為同向重復序列基因所包圍的抗生素耐藥性基因的載體,其中所述同向重復序列基因可以是必需基因,b)還可以在該載體中插入所述必需基因,適宜于該必需基因的啟動子及一個多克隆位點,c)用a)或b)所得載體轉(zhuǎn)染宿主細胞,d)去除宿主細胞中的染色體必需基因,e)體內(nèi)去除抗生素耐藥性基因,其中,步驟a)和b)可以用相反的順序完成。  
摘要 本發(fā)明涉及用于除去抗生素耐藥性和/或使質(zhì)粒穩(wěn)定的方法。本發(fā)明包括構(gòu)建載體的步驟,所述載體含有為同向重復序列基因所包圍的抗生素耐藥性基因。此同向重復序列基因可以是一個必需基因或Rek-序列。在后一種情況中,載體中存在具有適宜啟動子的必需基因。用所得的載體轉(zhuǎn)化宿主細胞,之后去除宿主細胞中必需的染色體基因并去除細胞中載體內(nèi)的抗生素耐藥性基因。優(yōu)選的必需基因是infA。本發(fā)明也涉及在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定維持載體的方法,在細胞中生產(chǎn)DNA的方法和在細胞中生產(chǎn)基酸,肽和蛋白的方法。而且,本發(fā)明還涉及已去除染色體必需基因,并含有下述載體的轉(zhuǎn)化宿主細胞,該載體含有相應的必需基因,還可能含有一或多個所需的基因X。該載體不攜帶抗生素耐藥性基因。本發(fā)明還包括從宿主獲得的載體DNA在制備用于基因治療的藥物組合物,如疫苗中的用途。攜帶含有適宜基因X的載體的細菌可被用于大規(guī)模生產(chǎn)該基因的基因產(chǎn)物所針對的化合物。  
國際公布 WO2003/000881 英 2003.1.3  
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