| 公開(公告)號 | CN1156582C |
| 公開(公告)日 | 2004.07.07 |
| 申請(專利)號 | CN02115452.X |
| 申請日期 | 2002.01.22 |
| 專利名稱 | 一種篩選具有抗菌活性的肽類物質(zhì)的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/18 |
| 分類號 | C12Q1/18 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 華中科技大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 董先智;徐輝碧;黃開勛;劉瓊 |
| 地址 | 430074 湖北省武漢市洪山區(qū)珞喻路1037號 |
| 頒證日 | 2004.07.07 |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 華中科技大學(xué)專利中心 |
| 代理人 | 紀元;方放 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項 | 一種篩選具有抗菌活性的肽類物質(zhì)的方法，該方法的步驟為：A：將蛋白質(zhì)組樣品經(jīng)過丙酮預(yù)處理以降低雜質(zhì)含量；B：將處理過的樣品在非變性條件下進行等電聚焦IEF，IEF之后從凝膠上切下兩根寬度相同的IEF膠條，在緩沖液A中平衡后進行第二向的聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用丙烯酰胺及甲叉雙丙烯酰胺制備非變性凝膠，上槽緩沖液的組分為Tris-base，Tricine和SDS，恒壓電泳至溴酚藍前緣到達底部；C：將PAGE所得的兩塊膠分別處理，一塊膠用考馬斯亮藍CBB染色，脫色后用做備份，另一塊膠則經(jīng)電印跡，將蛋白質(zhì)斑點轉(zhuǎn)移到NC膜上，使用不含SDS的緩沖液A；D：經(jīng)過0.01～0.2MTris-Cl，pH＝7.5的緩沖液漂洗除去SDS，將NC膜真空干燥；E：在NC膜上均勻地分布細菌，使其密度達到1×103～1×105CFU/mm2后，將膜置于牛肉膏固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，該培養(yǎng)基含顯色劑；同時含有細菌生長所需的底物，該底物經(jīng)細菌代謝能產(chǎn)生酸性產(chǎn)物；在NC膜上正常生長的細菌由于其代謝產(chǎn)物呈酸性因而在其周圍呈亮黃色，而有抗菌肽斑點的地方細菌生長受抑制，故而和周圍呈現(xiàn)出色差，為暗色的斑點；F：將NC膜上的斑點與雙向電泳所得到的凝膠上的斑點相對照，將凝膠上對應(yīng)于NC膜上抗菌肽色斑的斑點切下，然后對這些斑點用質(zhì)譜指紋圖，N端序列分析，氨基酸組成分析進行微量鑒定。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種準確、快速從天然產(chǎn)物中篩選具有抑菌生物活性的蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)的方法。克服了現(xiàn)有技術(shù)不能有效解決篩選速度、通量、準確率三者統(tǒng)一的弱點。該方法包括了等電聚焦，恒壓電泳，電印跡，細菌培養(yǎng)及微量鑒定，將高通量的分離方法和高精度的活性鎖定方法結(jié)合起來，能夠在細胞水平上直接篩選出具有抑菌生物活性的蛋白質(zhì)或多肽，運用該方法每循環(huán)的操作時間約為一周。 |
| 國際公布 |
