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用基因工程方法生產(chǎn)紅細胞刺激因子/粒細胞集落刺激因子融合蛋白

公開(公告)號 CN1150327C  
公開(公告)日 2004.05.19  
申請(專利)號 CN01104266.4  
申請日期 2001.02.27  
專利名稱 用基因工程方法生產(chǎn)紅細胞刺激因子/粒細胞集落刺激因子融合蛋白  
主分類號 C12N15/62  
分類號 C12N15/62;C12N15/63;C07K14/435;C07K19/00;C12P21/02  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 李欣越  
發(fā)明(設計)人 李洪興  
地址 130042 吉林省長春市北安路南二胡同103棟304  
頒證日 2004.05.19  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 上海智信專利代理有限公司  
代理人 高存秀  
國省代碼 吉林;22  
主權項 一種用基因工程方法生產(chǎn)紅細胞刺激因子/粒細胞集落刺激因子融合蛋白,其特征在于:該EPO/G-CSF融合蛋白具有EPO和G-CSF蛋白自然順序,并具有雙重活性,其EPO的生物活性為1×105U/mg;和其G-CSF的生物活性為1×107U/mg;其結構為通過一連接片段把紅細胞生長因子與粒細胞集落刺激因子連接起來,結構如下:紅細胞生長因子—連接片段一粒細胞集落刺激因子EPO———————LINKER———————G-CSF或 G-CSF———LINKER————EPO和具有EPO/G-CSF融合蛋白一級結構如下:APPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALRAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRGGSGGGSAAGGSGGTPLGPASSLPQSFLLKCLEQVRKIQGDGAALQEKLVSECATYKLCHPEELVLLGHSLGIPWAPLSSCPSQALQLAGCLSQLHSGLFLYQGLLQALEGISPELGPTLDTLQLDVADFATTIWQQMEELGMAPALQPTQGAMPAFASAFQRRAGGVLVASHLQSFLEVSYRVLRHLAQP  
摘要 本發(fā)明涉及用基因工程方法生產(chǎn)紅細胞生長因子/粒細胞集落刺激因子融合蛋白。通過對紅細胞生長因子和粒細胞集落刺激因子的亞克隆和末端改造以及用聚合酶鏈反應方法,把兩個基因通過一段多肽連接起來,使之形成表達質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化進入哺乳動物細胞并得到了高效表達。該融合蛋白具有紅細胞生長因子和粒細胞集落刺激因子的雙重活性,與相同劑量的EPO和G-CSF單體相比,融合蛋白具有較高的生物活性。本發(fā)明EPO的生物活性為1×105U/mg,其G-CSF的生物活性為1×107U/mg。  
國際公布  
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