公開(公告)號
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CN1453294A
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公開(公告)日
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2003.11.05
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申請(專利)號
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CN02117198.X
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申請日期
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2002.04.25
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專利名稱
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一種眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白的融合可溶表達、重組毒素的酸解釋放及其純化方法
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主分類號
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C07K19/00
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分類號
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C07K19/00;C12P21/02;C12N15/63
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中國藥品生物制品檢定所
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發(fā)明(設計)人
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徐康森;王永保;劉兢
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地址
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100061北京市天壇西里2號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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北京元中知識產(chǎn)權代理有限責任公司
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代理人
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王明霞
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國省代碼
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北京;11
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主權項
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一種融和方式可溶表達眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白、酸解釋放及其純化方法,其特征在于所述的方法包括:(1)神經(jīng)毒素基因的克;(2)可溶融合表達;(3)酸解;(4)酸解反應完成后,加入Tris堿至50mM,酸解液pH被調節(jié)至7.0左右,經(jīng)電泳檢查酸解完全后,進行凝膠柱純化;(5)重組蛋白主峰收集,真空冷凍濃縮,脫鹽,收集蛋白峰,測定重組蛋白濃度約為0.5mg/ml,重組神經(jīng)毒素的最終得率為35.3%(以滲透休克獲得量為1);(6)重組神經(jīng)毒素的綜合得率純化步驟 得率 純度滲透休克 100% 65%離子交換 82% 90%酸解 63% 28%凝膠過濾 76%脫鹽純品 91% >95%最終得率 35.3%
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摘要
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本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白的融和可溶表達、重組神經(jīng)毒素的酸裂解釋放及其生產(chǎn)純化方法,包括天然毒素的理化性質及序列的測定、神經(jīng)毒素基因的克隆和以融合方式的可溶表達、重組蛋白的融合位點的改造以及重組毒素的酸裂解釋放以及純化;采用本發(fā)明所述的用基因工程的方法表達生產(chǎn)重組神經(jīng)毒素可獲得大量可用于臨床的重組神經(jīng)毒素,可以使毒素的來源不受自然條件的制約。
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國際公布
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