| 公開(公告)號(hào) | CN1117160C |
| 公開(公告)日 | 2003.08.06 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN96198949.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 1996.11.28 |
| 專利名稱 | 通過高細(xì)胞密度發(fā)酵在大腸桿菌中制備重組蛋白質(zhì)的方法 |
| 主分類號(hào) | C12P21/02 |
| 分類號(hào) | C12P21/02;C12N15/72;C12N1/21;C07K16/28;//(C12N1/21,C12R1:19) |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1995.12.11 EP 95119478.6 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 默克專利股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | W·斯特里特馬特;S·馬特茲庫(kù);D·里森伯格;U·霍恩;U·克努非爾;M·庫(kù)加;R·溫德斯;A·普魯克圖恩;A·克里博 |
| 地址 | 聯(lián)邦德國(guó)達(dá)姆施塔特 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | PCT/EP96/05260 1996.11.28 |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | 1998.06.11 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 陳文平 |
| 國(guó)省代碼 | 德國(guó);DE |
| 主權(quán)項(xiàng) | 借助有分批發(fā)酵和分批補(bǔ)料階段的高細(xì)胞密度發(fā)酵，在已用攜帶外來基因和可誘導(dǎo)啟動(dòng)子的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌細(xì)胞中制備外源蛋白質(zhì)的方法，其中沒有底物或代謝副產(chǎn)物對(duì)生長(zhǎng)的限制，并從培養(yǎng)基中分離和純化所表達(dá)的蛋白質(zhì)，使用連續(xù)的、自動(dòng)或半自動(dòng)分析法及加料系統(tǒng)控制分批補(bǔ)料期的底物濃度，其特征在于在分批補(bǔ)料期中，(i)培養(yǎng)基中碳源的濃度保持恒定在0.1g/L至25g/L范圍內(nèi)，同時(shí)維持細(xì)胞不受限制的生長(zhǎng)即μ＝μmax，(ii)當(dāng)細(xì)胞密度為10至80g/L時(shí)經(jīng)誘導(dǎo)啟動(dòng)子在所說的分批補(bǔ)料期中開始外源蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，和(iii)在已誘發(fā)產(chǎn)物合成后，持續(xù)地供入可利用的氮和磷酸鹽，以及微量元素的鹽，及(iv)在整個(gè)分批補(bǔ)料期內(nèi)，經(jīng)以適當(dāng)方式向發(fā)酵液內(nèi)通入氧氣而將pO2調(diào)整到5至25％。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用大腸桿菌的宿主-載體系統(tǒng)有效地生成重組蛋白質(zhì)，特別是重組抗體分子，最好是抗體片段如小抗體的補(bǔ)料分批發(fā)酵方法。在給定的條件下，大腸桿菌細(xì)胞能夠以最大比生長(zhǎng)速度生長(zhǎng)至非常高的細(xì)胞密度。當(dāng)重組產(chǎn)物生成開始時(shí)，只有所生成的產(chǎn)物以限制方式作用于生長(zhǎng)。不發(fā)生因底物或代謝副產(chǎn)物造成的生長(zhǎng)限制。因此，能在特定空間和時(shí)間內(nèi)大量產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)。 |
| 國(guó)際公布 | WO97/21829 德 1997.6.19 |
