公開(公告)號(hào)
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CN1117160C
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公開(公告)日
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2003.08.06
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN96198949.1
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申請(qǐng)日期
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1996.11.28
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專利名稱
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通過高細(xì)胞密度發(fā)酵在大腸桿菌中制備重組蛋白質(zhì)的方法
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主分類號(hào)
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C12P21/02
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分類號(hào)
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C12P21/02;C12N15/72;C12N1/21;C07K16/28;//(C12N1/21,C12R1:19)
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1995.12.11 EP 95119478.6
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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默克專利股份有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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W·斯特里特馬特;S·馬特茲庫(kù);D·里森伯格;U·霍恩;U·克努非爾;M·庫(kù)加;R·溫德斯;A·普魯克圖恩;A·克里博
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地址
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聯(lián)邦德國(guó)達(dá)姆施塔特
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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PCT/EP96/05260 1996.11.28
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進(jìn)入國(guó)家日期
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1998.06.11
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
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代理人
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陳文平
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國(guó)省代碼
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德國(guó);DE
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主權(quán)項(xiàng)
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借助有分批發(fā)酵和分批補(bǔ)料階段的高細(xì)胞密度發(fā)酵,在已用攜帶外來基因和可誘導(dǎo)啟動(dòng)子的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌細(xì)胞中制備外源蛋白質(zhì)的方法,其中沒有底物或代謝副產(chǎn)物對(duì)生長(zhǎng)的限制,并從培養(yǎng)基中分離和純化所表達(dá)的蛋白質(zhì),使用連續(xù)的、自動(dòng)或半自動(dòng)分析法及加料系統(tǒng)控制分批補(bǔ)料期的底物濃度,其特征在于在分批補(bǔ)料期中,(i)培養(yǎng)基中碳源的濃度保持恒定在0.1g/L至25g/L范圍內(nèi),同時(shí)維持細(xì)胞不受限制的生長(zhǎng)即μ=μmax,(ii)當(dāng)細(xì)胞密度為10至80g/L時(shí)經(jīng)誘導(dǎo)啟動(dòng)子在所說的分批補(bǔ)料期中開始外源蛋白質(zhì)的產(chǎn)生,和(iii)在已誘發(fā)產(chǎn)物合成后,持續(xù)地供入可利用的氮和磷酸鹽,以及微量元素的鹽,及(iv)在整個(gè)分批補(bǔ)料期內(nèi),經(jīng)以適當(dāng)方式向發(fā)酵液內(nèi)通入氧氣而將pO2調(diào)整到5至25%。
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摘要
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本發(fā)明涉及用大腸桿菌的宿主-載體系統(tǒng)有效地生成重組蛋白質(zhì),特別是重組抗體分子,最好是抗體片段如小抗體的補(bǔ)料分批發(fā)酵方法。在給定的條件下,大腸桿菌細(xì)胞能夠以最大比生長(zhǎng)速度生長(zhǎng)至非常高的細(xì)胞密度。當(dāng)重組產(chǎn)物生成開始時(shí),只有所生成的產(chǎn)物以限制方式作用于生長(zhǎng)。不發(fā)生因底物或代謝副產(chǎn)物造成的生長(zhǎng)限制。因此,能在特定空間和時(shí)間內(nèi)大量產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)。
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國(guó)際公布
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WO97/21829 德 1997.6.19
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