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您現在的位置: 醫(yī)學全在線 > 藥學理論 > 中國藥品專利文獻 > 正文:高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法專利檢索:專利號/專利人/發(fā)明人
    

高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法

公開(公告)號 CN101045157A  
公開(公告)日 2007.10.03  
申請(專利)號 CN200610039240.8  
申請日期 2006.03.31  
專利名稱 高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法  
主分類號 A61K38/22(2006.01)I  
分類號 A61K38/22(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A61P43/00(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 江蘇省基因藥物工程技術研究中心  
發(fā)明(設計)人 徐根興;榮志剛;朱浩文;趙延發(fā);鐘慎政  
地址 215128江蘇省蘇州市吳中經濟開發(fā)區(qū)澄湖路42號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 南京蘇科專利代理有限責任公司  
代理人 陳忠輝;姚姣陽  
國省代碼 江蘇;32  
主權項 高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法,以表達人皮抑素基因的重組大腸桿菌菌體為原料,經過提取、復性和純化的工業(yè)化處理過程獲得重組人內皮抑素蛋白,進而配制成重組人內皮抑素注射劑,其特征在于:所述工業(yè)化處理過程具體包含以下兩個步驟—— (1)從菌體中提取純度大于82%的包涵體蛋白:首先將包涵體用洗滌液A及異丙醇分別離心沉淀,去除雜蛋白、脂質及核酸,再用提取液B溶解包涵體,用稀釋液C稀釋使目的蛋白析出,分離后將沉淀物用緩沖液洗滌,并用溶解液溶解,獲得純度大于82%的內皮抑素包涵體; (2)向步驟(1)獲得的純度大于82%的內皮抑素包涵體當中緩慢滴入復性液D進行復性,然后超濾濃縮,再用陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂進行分離純化,獲得純度為96%以上的重組人內皮抑素蛋白。  
摘要 本發(fā)明涉及一種利用大腸桿菌表達系統(tǒng)生產的高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法。其主要特征是,通過50至500立升發(fā)酵罐發(fā)酵表達,改進大腸桿菌包涵體二次提取工藝技術,使包涵體蛋白復性后純度達82%以上,并且在小于0.01mol/L的尿素中保持高度的可溶性,再將該內皮抑素包涵體進行復性、超濾濃縮,并用陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂進行分離純化,從而獲得純度為96%以上的重組人內皮抑素蛋白。本發(fā)明每立升發(fā)酵物能夠得到40-50mg純品,年制備量達到數千克以上;體內外活性測定表明,應用本發(fā)明技術方案制得的高活性可溶重組人內皮抑素產品,在治療依賴血管生成疾病的抗血管生成方面具有很好的療效。  
國際公布  
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