| 公開(公告)號 | CN101045157A |
| 公開(公告)日 | 2007.10.03 |
| 申請(專利)號 | CN200610039240.8 |
| 申請日期 | 2006.03.31 |
| 專利名稱 | 高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法 |
| 主分類號 | A61K38/22(2006.01)I |
| 分類號 | A61K38/22(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A61P43/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 江蘇省基因藥物工程技術研究中心 |
| 發(fā)明(設計)人 | 徐根興;榮志剛;朱浩文;趙延發(fā);鐘慎政 |
| 地址 | 215128江蘇省蘇州市吳中經濟開發(fā)區(qū)澄湖路42號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 南京蘇科專利代理有限責任公司 |
| 代理人 | 陳忠輝;姚姣陽 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權項 | 高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法，以表達人皮抑素基因的重組大腸桿菌菌體為原料，經過提取、復性和純化的工業(yè)化處理過程獲得重組人內皮抑素蛋白，進而配制成重組人內皮抑素注射劑，其特征在于：所述工業(yè)化處理過程具體包含以下兩個步驟—— (1)從菌體中提取純度大于82％的包涵體蛋白：首先將包涵體用洗滌液A及異丙醇分別離心沉淀，去除雜蛋白、脂質及核酸，再用提取液B溶解包涵體，用稀釋液C稀釋使目的蛋白析出，分離后將沉淀物用緩沖液洗滌，并用溶解液溶解，獲得純度大于82％的內皮抑素包涵體； (2)向步驟(1)獲得的純度大于82％的內皮抑素包涵體當中緩慢滴入復性液D進行復性，然后超濾濃縮，再用陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂進行分離純化，獲得純度為96％以上的重組人內皮抑素蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種利用大腸桿菌表達系統(tǒng)生產的高活性可溶重組人內皮抑素注射劑的制備方法。其主要特征是，通過50至500立升發(fā)酵罐發(fā)酵表達，改進大腸桿菌包涵體二次提取工藝技術，使包涵體蛋白復性后純度達82％以上，并且在小于0.01mol/L的尿素中保持高度的可溶性，再將該內皮抑素包涵體進行復性、超濾濃縮，并用陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂進行分離純化，從而獲得純度為96％以上的重組人內皮抑素蛋白。本發(fā)明每立升發(fā)酵物能夠得到40-50mg純品，年制備量達到數千克以上；體內外活性測定表明，應用本發(fā)明技術方案制得的高活性可溶重組人內皮抑素產品，在治療依賴血管生成疾病的抗血管生成方面具有很好的療效。 |
| 國際公布 |
