| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN101143889A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2008.03.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200610068871.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2006.09.14 |
| 專利名稱 | 一種大腸桿菌表達(dá)的重組人白介素-11的高效精純化方法 |
| 主分類號(hào) | C07K1/14(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K1/14(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 齊魯制藥有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 孫麗霞;王克波;魏麗冬;李海東;王晶翼 |
| 地址 | 250100山東省濟(jì)南市歷城區(qū)工業(yè)北路243號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 苗 峻 |
| 國(guó)省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種大腸桿菌表達(dá)的重組人白介素-11的高效精純化方法，其特征在于：它是對(duì)融合蛋白羥胺切割液進(jìn)行處理，步驟如下： (1)融合蛋白羥胺切割液經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)脫鹽柱脫鹽，得切后脫鹽液； (2)脫鹽液依次通過(guò)陰離子交換層析柱與陽(yáng)離子交換層析柱串聯(lián)層析系統(tǒng)，截留未被切開(kāi)的融合蛋白及大量的雜質(zhì)； (3)采用Gly-NaOH(甘氨酸-氫氧化鈉)緩沖液對(duì)串聯(lián)柱進(jìn)行平衡，使融合蛋白吸附到陰離子交換層析柱上，目標(biāo)蛋白吸附到陽(yáng)離子交換層析柱上； (4)采用添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氫氧化鈉)緩沖液中對(duì)進(jìn)行了步驟(3)處理后的陽(yáng)離子交換層析柱進(jìn)行洗脫，使目的蛋白穿出陽(yáng)離子交換層析柱，收集洗脫蛋白液； (5)洗脫蛋白液經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)脫鹽柱脫鹽去除Na+、Cl-，得到高純度的蛋白樣品； 上述步驟(2)中的陰離子交換層析柱的層析介質(zhì)包括瓊脂糖凝膠(Sepharose)類或聚苯乙烯(SOURCE)類，配基包括季銨基Q或二乙基氨乙基DEAE； 上述步驟(2)和步驟(4)中的陽(yáng)離子交換層析柱的層析介質(zhì)包括瓊脂糖凝膠(Sepharose)類或聚苯乙烯(SOURCE)類，配基包括磺甲基S或磺丙基SP或羧甲基CM。 |
| 摘要 | 一種重組人白介素11(rhIL-11)的精純化方法。步驟包括如下：利用葡聚糖凝膠G-25脫鹽柱對(duì)融合蛋白進(jìn)行脫鹽后，收集脫鹽液進(jìn)行陰、陽(yáng)離子交換層析柱串聯(lián)上樣，上樣完畢后用特有的Gly-NaOH緩沖液洗脫，收集主要洗脫蛋白液，上葡聚糖凝膠G-25脫鹽柱脫鹽，得到高純度蛋白樣品。本方法具有適合規(guī)模化生產(chǎn)、操作簡(jiǎn)便、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品純度高、工藝穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
