公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN101143889A
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公開(kāi)(公告)日
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2008.03.19
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200610068871.2
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申請(qǐng)日期
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2006.09.14
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專利名稱
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一種大腸桿菌表達(dá)的重組人白介素-11的高效精純化方法
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主分類號(hào)
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C07K1/14(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K1/14(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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齊魯制藥有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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孫麗霞;王克波;魏麗冬;李海東;王晶翼
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地址
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250100山東省濟(jì)南市歷城區(qū)工業(yè)北路243號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司
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代理人
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苗 峻
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國(guó)省代碼
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山東;37
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主權(quán)項(xiàng)
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一種大腸桿菌表達(dá)的重組人白介素-11的高效精純化方法,其特征在于:它是對(duì)融合蛋白羥胺切割液進(jìn)行處理,步驟如下: (1)融合蛋白羥胺切割液經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)脫鹽柱脫鹽,得切后脫鹽液; (2)脫鹽液依次通過(guò)陰離子交換層析柱與陽(yáng)離子交換層析柱串聯(lián)層析系統(tǒng),截留未被切開(kāi)的融合蛋白及大量的雜質(zhì); (3)采用Gly-NaOH(甘氨酸-氫氧化鈉)緩沖液對(duì)串聯(lián)柱進(jìn)行平衡,使融合蛋白吸附到陰離子交換層析柱上,目標(biāo)蛋白吸附到陽(yáng)離子交換層析柱上; (4)采用添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氫氧化鈉)緩沖液中對(duì)進(jìn)行了步驟(3)處理后的陽(yáng)離子交換層析柱進(jìn)行洗脫,使目的蛋白穿出陽(yáng)離子交換層析柱,收集洗脫蛋白液; (5)洗脫蛋白液經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)脫鹽柱脫鹽去除Na+、Cl-,得到高純度的蛋白樣品; 上述步驟(2)中的陰離子交換層析柱的層析介質(zhì)包括瓊脂糖凝膠(Sepharose)類或聚苯乙烯(SOURCE)類,配基包括季銨基Q或二乙基氨乙基DEAE; 上述步驟(2)和步驟(4)中的陽(yáng)離子交換層析柱的層析介質(zhì)包括瓊脂糖凝膠(Sepharose)類或聚苯乙烯(SOURCE)類,配基包括磺甲基S或磺丙基SP或羧甲基CM。
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摘要
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一種重組人白介素11(rhIL-11)的精純化方法。步驟包括如下:利用葡聚糖凝膠G-25脫鹽柱對(duì)融合蛋白進(jìn)行脫鹽后,收集脫鹽液進(jìn)行陰、陽(yáng)離子交換層析柱串聯(lián)上樣,上樣完畢后用特有的Gly-NaOH緩沖液洗脫,收集主要洗脫蛋白液,上葡聚糖凝膠G-25脫鹽柱脫鹽,得到高純度蛋白樣品。本方法具有適合規(guī)模化生產(chǎn)、操作簡(jiǎn)便、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品純度高、工藝穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)。
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國(guó)際公布
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