| 公開(公告)號 | CN101092618A |
| 公開(公告)日 | 2007.12.26 |
| 申請(專利)號 | CN200710068724.X |
| 申請日期 | 2007.05.22 |
| 專利名稱 | 溶葡萄球菌酶的制備方法和其衍生物及衍生物的制備方法 |
| 主分類號 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/09(2006.01)I;C12N9/36(2006.01)I;C12N15/56(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 杭州北斗生物技術(shù)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉國安;劉沐榮;康經(jīng)武 |
| 地址 | 310011浙江省杭州市祥園路39號5號樓5樓 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 杭州豐禾專利事務所有限公司 |
| 代理人 | 王鵬舉 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項 | 溶葡萄球菌酶的制備方法，其特征在于包括以下的步驟： (1)、溶葡萄球菌酶基因的設(shè)計與合成； (2)、表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化大腸桿菌工程菌：將溶葡萄球菌酶基因片段插入到表達載體質(zhì)粒的酶切位點，然后直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主菌，其中所述的表達載體質(zhì)粒是pET系列載體質(zhì)粒； (3)、陽性克隆的篩選、培養(yǎng)、誘導表達：篩選出陽性克隆在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，經(jīng)誘導使目標蛋白表達； (4)、表達產(chǎn)物的分離、純化：將大腸桿菌工程菌菌體收集、破菌，經(jīng)離心得到破菌液上清，然后對破菌液上清用層析技術(shù)純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及溶葡萄球菌酶的制備方法和其衍生物及衍生物的制備方法。溶葡萄球菌酶的制備方法主要包括：設(shè)計并合成優(yōu)化的溶葡萄球菌酶基因，構(gòu)建表達載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌工程菌，篩選高表達菌株，發(fā)酵培養(yǎng)工程菌，表達產(chǎn)物分離純化。其中所述的表達載體質(zhì)粒是pET系列載體質(zhì)粒。本發(fā)明的方法，表達方案簡單，表達量高，純化工藝簡單，收率高，表達產(chǎn)物可溶，不需要復性，直接用層析方法進行純化，純化收率大大提高，適合大規(guī)模制備。本發(fā)明公開的溶葡萄球菌酶衍生物由PEG修飾后免疫原性降低，半衰期延長，適合臨床應用于葡萄球菌感染的治療。 |
| 國際公布 |
