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抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應(yīng)用

公開(kāi)(公告)號(hào) CN101096385A  
公開(kāi)(公告)日 2008.01.02  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200710009084.5  
申請(qǐng)日期 2007.06.08  
專(zhuān)利名稱(chēng) 抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應(yīng)用  
主分類(lèi)號(hào) C07K19/00(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C07K19/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 廈門(mén)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 周克夫;李俊燕  
地址 361005福建省廈門(mén)市思明南路422號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 廈門(mén)南強(qiáng)之路專(zhuān)利事務(wù)所  
代理人 馬應(yīng)森  
國(guó)省代碼 福建;35  
主權(quán)項(xiàng) 抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法,其特征在于其包括以下步驟: 1)根據(jù)ProTα的基因序列,設(shè)計(jì)上游引物P1和下游引物P2,上游引物P1和下游引物P2分別為: 上游引物P1:5’GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’, 下游引物P2:5’GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’, 將上游引物P1引入BamHI酶切位點(diǎn),將下游引物P2引入EcoRI酶切位點(diǎn); 2)采用RT-PCR方法獲得前胸腺素α原全長(zhǎng)基因cDNA,將PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-TVector連接,重組載體命名為T(mén)P,轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞,將鑒定的陽(yáng)性菌液測(cè)序; 3)采用生物學(xué)軟件DNAman對(duì)7個(gè)單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列進(jìn)行比對(duì); 4)用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物,將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體pGEX 6P-1中,命名為PP,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,獲得轉(zhuǎn)基因BL21菌株,在LB培養(yǎng)基37℃培養(yǎng),加入IPTG,37℃誘導(dǎo)表達(dá),菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解,沸水浴后離心取上清,進(jìn)行SDS-PAGE電泳,獲得融合蛋白。  
摘要 抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法,涉及一種融合蛋白。根據(jù)ProTα的基因序列,設(shè)計(jì)上下游引物P1和P2,將P1引入BamHI酶切位點(diǎn),將P2引入EcoR I酶切位點(diǎn)。采用RT-PCR方法得前胸腺素α原全長(zhǎng)基因cDNA,將PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-T Vector連接,轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞,對(duì)7個(gè)單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列比對(duì)。用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物,將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體pGEX 6P-1中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌得轉(zhuǎn)基因BL21菌株,培養(yǎng)后加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá),菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解,離心取上清電泳。  
國(guó)際公布  
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