實(shí)驗(yàn)三
[目的要求]
通過對(duì)高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基的配制、掌握配制合成培養(yǎng)基的一般方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。如果加入適量的抗菌藥物(如各種抗生素、酚等)，則可用來分離各種放線菌。此合成培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)是含有多種化學(xué)成分已知的無機(jī)鹽，這些無機(jī)鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補(bǔ)加微量元素。
[教學(xué)內(nèi)容]
高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基的制備
實(shí)驗(yàn)四
[目的要求]
通過對(duì)分離真菌的馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基配制、掌握選擇培養(yǎng)基的配制方法，并確選擇的原理。
[實(shí)驗(yàn)原理]
馬丁氏培養(yǎng)基是一種用來分離真菌的選擇性培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的特點(diǎn)是培養(yǎng)基中加入的孟加拉紅和鏈霉素能有效的抑制細(xì)菌和放線功菌的生長(zhǎng)，而對(duì)真菌無抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離真菌的目的。
[教學(xué)內(nèi)容]
馬丁氏培養(yǎng)基的制備
實(shí)驗(yàn)五
[目的要求]
1.了解干熱滅菌的原理和應(yīng)用范圍。
2.學(xué)習(xí)干熱滅菌的操作技術(shù)。
[實(shí)驗(yàn)原理]
干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。
[教學(xué)內(nèi)容]
干熱滅菌
實(shí)驗(yàn)六
[目的要求]
1.了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。
2.學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的操作方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。
[教學(xué)內(nèi)容]
高壓蒸汽滅菌
實(shí)驗(yàn)七
[目的要求]
了解紫外線滅菌的原理和方法
[實(shí)驗(yàn)原理]
紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的。波長(zhǎng)為200-300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強(qiáng)。在波長(zhǎng)一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)制主要是因?yàn)樗T導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成［O］，再使O2氧化生成自臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成過氧化氫(H2O2)。O3和H2O2均有殺菌作用。
[教學(xué)內(nèi)容]
紫外線滅菌
實(shí)驗(yàn)八
[目的要求]
了解過濾除菌的原理；掌握微孔濾膜過濾除菌的方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
過濾除菌是通過機(jī)械作用濾去液體或氣體中細(xì)菌的方法。根據(jù)不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。此法除菌的最大優(yōu)點(diǎn)是可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分，但由于濾量有限，所以一般只適用于實(shí)驗(yàn)室中小量溶液的過濾除菌。
[教學(xué)內(nèi)容]
微孔濾膜過濾除菌
實(shí)驗(yàn)九
[目的要求]
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)。
[實(shí)驗(yàn)原理]
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有：1).簡(jiǎn)易單細(xì)胞挑取法; 2).平板分離法。
土壤是微生物生活的大本營(yíng)，它所含微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。因此土壤是微生物多樣性的重要場(chǎng)所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離、純化得到許多有價(jià)值的菌株。
[教學(xué)內(nèi)容]
微生物的分離與純化
實(shí)驗(yàn)十
[目的要求]
1.了解不同的微生物在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征。
2.進(jìn)一步熟練和掌握微生物無菌操作技術(shù)。
[實(shí)驗(yàn)原理]
微生物的培養(yǎng)特征是指微生物在固體培養(yǎng)基上、半固體和液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后所表現(xiàn)出的群體形態(tài)特征。不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征，這些特征一般用固體、半固體和液體培養(yǎng)基來進(jìn)行檢測(cè)。
檢測(cè)微生物的培養(yǎng)特征時(shí)，接種和培養(yǎng)過程中必須保證不被其他微生物所污染，因此，除工作環(huán)境要求盡可能地避免或減少雜菌污染外，熟練地掌握各種無菌操作接種技術(shù)是很重要。
[教學(xué)內(nèi)容]
微生物的培養(yǎng)特征
實(shí)驗(yàn)十一
[目的要求]
1.學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法。
2.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法和無菌操作技術(shù)。
[實(shí)驗(yàn)原理]
簡(jiǎn)單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色，這是因?yàn)椋涸谥行�、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷(酸性染料電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷)，因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著。染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對(duì)比，在顯微鏡下更易于識(shí)別。常用作簡(jiǎn)單染色的染料有：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。
當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，此時(shí)可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色。
[教學(xué)內(nèi)容]
細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法
實(shí)驗(yàn)十二
[目的要求]
1. 學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法。
2. 了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。
[實(shí)驗(yàn)原理]
革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家Christain Gram氏創(chuàng)立的，而后一些學(xué)者在此礎(chǔ)上作了某些改進(jìn)。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。
[教學(xué)內(nèi)容]
革蘭氏染色法
實(shí)驗(yàn)十三
[目的要求]
1. 學(xué)習(xí)并初步掌握鞭毛染色法，觀察細(xì)菌鞭毛的形態(tài)特征。
2. 學(xué)習(xí)用壓滴法和懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。
[實(shí)驗(yàn)原理]
鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)“器官”，細(xì)菌是否具有鞭毛，以及鞭毛著生的位置和數(shù)目是細(xì)菌的一項(xiàng)重要形態(tài)特征。細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)，其直徑通常為0.01～0.02微米，所以，除了很少數(shù)能形成鞭毛束(由許多根鞭毛構(gòu)成)的細(xì)菌可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛束的存在外，一般細(xì)菌的鞭毛均不能用光學(xué)顯微鏡直接觀察到，而只能用電子顯微鏡觀察。要用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌的鞭毛，必須用鞭毛染色法。
[教學(xué)內(nèi)容]
鞭毛染色法及細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察
實(shí)驗(yàn)十四
[目的要求]
1． 學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。
2． 初步了解放線菌的形態(tài)特征。
[實(shí)驗(yàn)原理]
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)介紹其中幾種常用方法。
[教學(xué)內(nèi)容]
放線菌形態(tài)的觀察
實(shí)驗(yàn)十五
[目的要求]
學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。增強(qiáng)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。
[實(shí)驗(yàn)原理]
微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小
的測(cè)定在顯微鏡下，借助于特殊的測(cè)量工具—測(cè)微尺，包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。
[教學(xué)內(nèi)容]
微生物大小的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)十五
[目的要求]
1. 觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。
2. 掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。
[實(shí)驗(yàn)原理]
酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見細(xì)菌大幾倍甚至十幾倍。
美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的、而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對(duì)酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。
[教學(xué)內(nèi)容]
酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別
實(shí)驗(yàn)十六
[目的要求]
學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。
[實(shí)驗(yàn)原理]
霉菌可產(chǎn)生復(fù)什分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多(約為3～10微米)，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。
[教學(xué)內(nèi)容]
霉菌的形態(tài)觀察
實(shí)驗(yàn)十七
[目的要求]
1.明確血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理
2.掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。
[教學(xué)內(nèi)容]
顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
實(shí)驗(yàn)十八
[目的要求]
學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony -forming units, cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。
[教學(xué)內(nèi)容]
平板菌落計(jì)數(shù)法
實(shí)驗(yàn)十九
[目的要求]
1.了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理
2.學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。
[實(shí)驗(yàn)原理]
當(dāng)光線通過微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測(cè)出(圖Ⅷ-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測(cè)定光密度，作出光密度--菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。因此，對(duì)于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[教學(xué)內(nèi)容]
光電比濁計(jì)數(shù)法
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