用自制藥敏試紙進行肉雞大腸桿菌病的藥敏試驗
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一 試驗材料和方法 1 藥敏試紙的制備 藥敏紙片的制備:取杭州富陽特種紙廠生產(chǎn)的直徑18cm的定量濾紙,用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片,取100片圓形紙片放入清潔干燥的
青霉素空瓶中,瓶口以單層
牛皮紙包扎,120℃干燥滅菌2小時備用! ∷幰旱闹苽洌喊传F藥說明書上標明的治療量比例配制藥液。如規(guī)格為100g的抗菌物,包裝說明兌水200千克,即用天平稱藥物1g加50mL的滅菌注射水置于滅菌器皿內(nèi),充分溶解后吸出1mL置于另一個滅菌容器中,再加入39mL的滅菌注射水! ∷幟艏埰闹谱鳎簩⒑100片紙片的青霉素瓶內(nèi)加入配置好的藥液0.5mL,并翻動紙片,使各紙片充分浸透藥液,同時在瓶口上記錄藥物名稱,放37℃溫箱內(nèi)過夜,干燥后即密封,切勿受潮,置陰暗干燥處存放備用! 2 細菌的分離培養(yǎng)與鑒定 細菌的分離培養(yǎng):采用常規(guī)法將細菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24小時。挑取單個菌落于普通瓊脂平板上進行純培養(yǎng),37℃培養(yǎng)24小時。挑取單個菌落進行革蘭氏染色、鏡檢,鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直桿菌,初步確定為大腸桿菌! ∩囼灒喝〈龣z菌培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、
葡萄糖、乳糖、
麥芽糖、
甘露醇、蔗糖、
尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上,置37℃恒溫箱中,培養(yǎng)24小時。結(jié)果顯示:能發(fā)酵
葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇,產(chǎn)酸。尿素酶試驗陰性,不產(chǎn)生H2S,有鞭毛,能運動。符合大腸桿菌的生化特性,證實確為大腸桿菌。 3 藥敏試驗將麥康凱培養(yǎng)基上認定的大腸桿菌菌落,無菌環(huán)境下用接種環(huán)挑出,均勻涂布在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,同時等距離放置以下藥敏紙片:
諾氟沙星、
環(huán)丙沙星、
頭孢噻肟、
氨芐西林、多
粘菌素、
頭孢曲松、氟苯尼考,置恒溫箱中培養(yǎng)24小時,按以下標準判定藥物敏感度。
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