近20年來分子克隆技術(shù)的發(fā)展突飛猛進,重組DNA操作技術(shù)包括的范圍不斷擴大,DNA克隆的方法亦多種多樣,特別是PCR技術(shù)的應(yīng)用,以及RFLP、SSCP等技術(shù)的開展,使得DNA克隆技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛。
DNA克隆技術(shù)在動脈粥樣硬化等疾病的病因及診療研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因發(fā)生的特異突變時,可以設(shè)計合成擴增引物,進行模板DNA的PCR擴增,所得的PCR產(chǎn)物較小,僅有300多bp,且純度不足以進測序。為了對此突變序列進行測序分析,就可以采用DNA克隆的方法,將此PCR產(chǎn)物連接到www.med126.com細菌質(zhì)粒上,再進一步純化后測序,以便鑒定脂蛋白酯酶的突變序列。
下面簡要介紹DNA克隆和測序的常用方法。