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免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗:第五節(jié) 自然殺傷細胞的檢測

NK細胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD69等多種抗原,但均非NK細胞所特有,因此現(xiàn)今極少以CD系列抗原為指標鑒定和計數(shù)NK細胞,而多檢測NK細胞活性。NK細胞株作為靶細胞,而測小鼠NK細胞活性則用YAC細胞株,檢測方法多種多樣,各有其優(yōu)缺點。(一)形態(tài)法…

NK細胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD69等多種抗原,但均非NK細胞所特有,因此現(xiàn)今極少以CD系列抗原為指標鑒定和計數(shù)NK細胞,而多檢測NK細胞活性。NK細胞株作為靶細胞,而測小鼠NK細胞活性則用YAC細胞株,檢測方法多種多樣,各有其優(yōu)缺點。

(一)形態(tài)法

檢測原則是將效應(yīng)細胞與靶按一定比例混合共育,繼而臺盼藍或伊紅Y等活細胞拒染的染料處理,然后分別計數(shù)著染的死細胞和不著染的活細胞,由此推算NK的細胞的殺傷活性。本法簡便,易于掌握,但判斷死細胞與活細胞不免帶有檢測者的主觀因素,也無法計數(shù)輕微損傷的細胞。

(二)酶釋法

檢測原則是將一定比例的效應(yīng)細胞和靶細胞共溫一段時間后,離心沉淀,取上清液檢測靶細胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷酸酶含量。本法經(jīng)濟、快速簡便,但可定量。缺點是靶細胞內(nèi)堿性磷酸酶含量低或因某些未死亡細胞能自行釋放,從而影響法靈敏度和特異性。此m.payment-defi.com/job/外乳酸脫氫酶分子較大,僅當(dāng)靶細胞膜完全被破壞時才釋放,故不能較早地反映效應(yīng)的功能。

(三)熒光法

檢測原則是用熒光素標記靶細胞,經(jīng)與效應(yīng)細胞共溫后,離心法上清,用熒光計檢測剩余的活靶細胞的熒光,www.med126.com缺點是活細胞釋放的熒光常被效應(yīng)細胞和培養(yǎng)液等所粹滅。另外,熒光分析法常遇細胞自然釋放率高,熒光本底強,影響靈敏度。為克服上述障礙,用時間分辨熒光免疫分析,將靶細胞用鑭系元素銪(Eu3+)的螯合物標記,按同法與效應(yīng)細胞共溫后,用時間分辨熒光計檢測熒光,可除去非特異性熒光本底。本法實驗時間短,效靶細胞僅需共溫2h,檢測速度快,特異性強。

檢測原則是將效應(yīng)細胞和靶細胞按一定比例混合溫育后,直接檢測靶細胞。分有靶細胞漿釋放法和胞核釋放法。

1.胞漿釋放法常用51Cr釋放法。51Cr透過細胞膜與胞漿中小分子蛋白質(zhì)結(jié)合,一旦細胞膜遭破壞,同位素隨蛋白質(zhì)外溢,并且不會被完整的細胞再度攝入。本法操作簡便快速能定量,缺點是自然釋放率高,所需靶細胞數(shù)量多,51Cr半衰期短。近年有用111In(銦)檢測NK細胞活性,優(yōu)點是標記率高,用量微,以γ射線放射,可釋放90%的自身能量,比51Cr高10倍,自然釋放率低,僅為51Cr的一半。

2.胞核釋放法常用3H-TdR或125IudR作為DNA合成的前體物,可被攝入靶細胞核內(nèi)。當(dāng)效應(yīng)細胞和靶細胞共溫后,用胰酸和DNA酶處理可使遭破壞的胞核內(nèi)容物釋放。本法自然釋放率比51Cr低,半衰期較長,方法的敏感性高,故被大多數(shù)實驗室所采用。

(五)化學(xué)發(fā)光法

檢測原則是當(dāng)效應(yīng)細胞與靶細胞接觸時,效應(yīng)細胞呼吸爆發(fā),生成極不穩(wěn)定的O2和OH等,放出光子,在發(fā)光劑存在的條件下,可被電倍增管接受和計數(shù),發(fā)光量與NK細胞殺傷能力相關(guān)。

總之,檢測NK細胞活性的方法多種多樣,方法的簡繁有很大差異,但敏感性和特異性亦異,從簡單的活細胞計數(shù)直至最先進的流式細胞儀分析,一般可根據(jù)實驗要求和具體條件選用。

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