151.在酶聯(lián)免疫吸附試驗中會出現(xiàn)前滯現(xiàn)象(阻滯現(xiàn)象)嗎?
酶聯(lián)免疫吸附試驗的基本原理和步驟為:
1)抗原或抗體結(jié)合到固相載體的表面并保持其反應(yīng)能力。
(2)抗原或抗體與酶相結(jié)合并保持其反應(yīng)能力及酶活性。
(3)結(jié)合物與相應(yīng)的酶聯(lián)抗原或抗體反應(yīng),再加入相應(yīng)的底物。這時被結(jié)合到結(jié)合物上的酶可以催化底物水解、氧化或還原,產(chǎn)生有色的物質(zhì)。顏色的深淺與相應(yīng)的抗原抗體量成正比,因此可以用來定量抗原或抗體。
因此,這類反應(yīng)與試管沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)不同。由于反應(yīng)物中抗原或抗體被固定在固相載體上,而且要把沒固定的洗掉,反應(yīng)后還要把過剩的沒參加反應(yīng)的抗體或抗原再洗掉,所以反應(yīng)僅僅停留在第1階段上,沒有試管液相反應(yīng)的第2階段。因此,在酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)中不會出現(xiàn)試管凝集或沉淀反應(yīng)中抗原或抗體過剩所引起的阻滯現(xiàn)象。
同樣道理,固相放射免疫技術(shù)也不會出現(xiàn)阻滯現(xiàn)象。
包被對抗原或抗體用量過大,效果不好,這是空間障礙造成的。
152、加溫為什么能促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)?
抗原抗體借助擴(kuò)散穿越介質(zhì)分子,彼此互相碰撞而發(fā)生反應(yīng)。加溫能促進(jìn)擴(kuò)散和碰撞,所以能促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)。但有的抗原抗體反應(yīng)在較低溫度下就很強(qiáng)烈。比如,冷溶血素和冷凝集素,在4℃左有反應(yīng)很好。冷溶血素在4℃下結(jié)合到紅細(xì)胞上,然后加溫到37℃左右開始溶血。一般抗原抗體反應(yīng)都是在37℃°C左右進(jìn)行的,當(dāng)加溫到56~6℃時,抗原抗體復(fù)合物將要解離。
153、何謂抗原、免疫原?二者關(guān)系是什么?
對這個問題做出明確回答的材料很少?蛇@兩個概念在日常工作和學(xué)術(shù)活動中又經(jīng)常應(yīng)用,F(xiàn)接著有關(guān)文獻(xiàn)作些介紹,以供參考。
在精典免疫學(xué)里,抗原是指進(jìn)入機(jī)體能引起抗體產(chǎn)生,并且能和其抗體發(fā)生特異反應(yīng)的物質(zhì)。但據(jù)現(xiàn)代免疫學(xué)的觀點(diǎn),這個定義就不充分了。因為隨著非感染免疫學(xué)的發(fā)展,又出現(xiàn)了另一些類型的免疫反應(yīng)。這些類型的免疫反應(yīng)并不產(chǎn)生抗體,或者說抗體的作用不是主要的。比如延緩型過敏反應(yīng),移殖和耐受現(xiàn)象都屬于這1類。在這些情況下,抗原對機(jī)體的作用是引起對抗原敏感的淋巴細(xì)胞的出現(xiàn)或者降低淋巴細(xì)胞對抗原的反應(yīng)性。
考慮到上述這些新情況,目前的抗原定義為:進(jìn)入機(jī)體能引起特異的免疫反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原。免疫反應(yīng)包括:產(chǎn)生抗體,出現(xiàn)致敏的淋巴細(xì)胞或者耐受狀態(tài)。與精典免疫學(xué)中抗原的定義相比這個定義要廣得多。
用于免疫并能誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的物質(zhì)就是免疫原。
從上述抗原和免疫原的定義出發(fā),可以看出它們的關(guān)系是,抗原的含義要比免疫原廠,而且免疫原主要強(qiáng)調(diào)用于免疫?乖庖咴湍褪荏@。
154、抗體、沉淀素、凝集素,溶血素,免疫球蛋白的關(guān)系如同?
抗體是指與抗原能發(fā)生特異反應(yīng)的物質(zhì)的總稱。
免疫球蛋白是指與抗體活性有關(guān)的血清中的蛋白質(zhì),屬于γ球蛋白。
沉淀素為引起沉淀反應(yīng)的抗體。
凝集素為引起凝集反應(yīng)的抗體。
溶血素為引起溶血反應(yīng)的抗體。
這些概念并不是孤立的,截然不同的,而是彼此聯(lián)系,彼此相通的。
如果要問抗體究竟是什么東西?即抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么?答案就是:抗體的化學(xué)本質(zhì)是兔疫球蛋白,但免疫球蛋白不一定都表現(xiàn)出抗體活性,更不都是某廣特異性的抗體。
對于抗體可以從不同的角度進(jìn)行分類。從來源分類,可有同種抗體和異種抗體。從反應(yīng)的能力上來分,可以有完全抗體和不完全抗體。從反應(yīng)的形式上來分,就有沉淀素、凝集素和溶血素等。它們并不是完全不同的物質(zhì),比如lgG可表現(xiàn)為沉淀素,但也可以表現(xiàn)為溶血素,也不是不能凝集顆粒抗原,只不過它的凝集活性較lgM低罷了。它所以表現(xiàn)出不同反應(yīng)形式,這主要是因為抗原以及反應(yīng)條件不同。
155、何為抗原抗體有效結(jié)合價?
抗原抗體的結(jié)合價一般來講是變化的。當(dāng)抗體過剩時,它能表現(xiàn)為最低結(jié)合價,即1價,最高結(jié)合價也不會超過決定基數(shù)或抗體結(jié)合部位數(shù)。有效結(jié)合價是指在某一反應(yīng)中,在特定的抗原抗體濃度比以及其它條件下,抗原(或抗體)實際參與結(jié)合的決定基數(shù)(或結(jié)合部位數(shù))。以lgM為例,它可以呈1價,也可以呈10價,所以lgM是變價的,其結(jié)合價變化范圍是1~10.但是,當(dāng)它和l個具體的抗原以特定的濃度比相混合時,將呈現(xiàn)一定的結(jié)合價,比如5價。對于抗原也是一樣。醫(yī)學(xué)全在線www.med126.com
156.抗原抗體反應(yīng)中,第一階段為什么進(jìn)行得很快;而反應(yīng)第二階段為什么很慢?
對于抗原抗體反應(yīng)歷程,傳統(tǒng)的看法是分成兩個階段:第1階段是抗原抗體反應(yīng)歷程,傳統(tǒng)的看法是分成2個階段:第1階段是抗原抗體反應(yīng)形成簡單的復(fù)合物;第2階段是這些簡單復(fù)合物之間的再結(jié)合,出現(xiàn)沉淀或凝集。
實驗表明,反應(yīng)的第l階段幾乎是瞬間完成的,在幾ms到幾lOms,最遲在幾min內(nèi)完成。而第2階段反應(yīng)要慢得多。甚至要nd才能完成。
這有2個方面的原因:第1,參與第1階段反應(yīng)的是游離的抗原或抗體,與抗原抗體復(fù)合物比較起來,它們要小得多,擴(kuò)散速度要快得多,因此碰撞機(jī)會也就很多。第2,從第1反應(yīng)階段所形成的小復(fù)合物到產(chǎn)生肉眼可見的沉淀物或凝集物,要經(jīng)過多次地反復(fù)地碰撞結(jié)合。而且復(fù)合物越來越大,擴(kuò)散速度越來越小,碰撞結(jié)合的機(jī)會就越來越少,所以反應(yīng)很慢。
157.何謂間接直接熒光抗體染色法?
間接法分兩個步驟,第1步周未標(biāo)識的抗體與標(biāo)本的抗原作用,沖洗后,第2步用示記熒光色素的特異的抗球蛋白熒光抗體染色,如第1步有特異的抗原抗體結(jié)合,則第:步由于標(biāo)本中有抗體球蛋白存在。染色時可破熒光標(biāo)識的抗球蛋白抗體染色,例如在標(biāo)仁片中有脊髓灰質(zhì)炎病毒感染的細(xì)胞,第1步先用兔抗脊髓灰質(zhì)病毒免疫血清作用,沖先后再以羊抗兔免疫球蛋白熒光抗體染色,即可梁上特異熒光。
此法可以1種熒光抗體(抗球蛋白熒光抗體)用于多種抗原抗體系統(tǒng),比較方便。出于第1步結(jié)合的中間抗體分子,可以分別結(jié)合多個抗球蛋白熒光抗體分子,因此敏感性主往較直接法為高,但間接法涉及的成份較多,引起非特異性熒光機(jī)會較多,必須做一系列對照。
直接法是利用熒光色素標(biāo)識的特異性抗體直接檢查未知抗原,此法優(yōu)點(diǎn)是特異性高、簡單、快速、但必須標(biāo)記對各種不同抗原的相應(yīng)熒光抗體,手續(xù)復(fù)雜,敏感性較間接法乳
158、何謂熒光補(bǔ)體法?
與間接法相似,其不同點(diǎn)是在用免疫血清處理時,加上新鮮啄鼠血清作為補(bǔ)體,使標(biāo)本的抗原形成抗原-抗體-補(bǔ)體復(fù)合物,第二步用抗琢鼠補(bǔ)體C3的熒光抗體染色,鑒定未知抗原或未知抗體。此法敏感性很高,但由于更容易出現(xiàn)非特異性熒光染色,且補(bǔ)體洼質(zhì)不穩(wěn)定,每次均需新鮮抽取,故在實際應(yīng)用上,此法尚未推廣。
159、何請間接法一一酶標(biāo)記抗球蛋白測定抗體法?
將抗原吸附或結(jié)合在固相載體上(常用聚苯乙稀等塑料小管小盤或小珠等作為固相載體,,然后加入含有特異抗體的血清,經(jīng)孵育一定時間后,固相體表面抗原與抗體形成夏合物,洗滌除去其它成份,再加入酶標(biāo)記的抗球蛋白抗體,它與固相載體上的免疫復(fù)合物結(jié)合。經(jīng)洗滌除去多余的酶標(biāo)記抗體,加入底物,在酶的催化作用下底物發(fā)生反應(yīng)(降解或氧化還原,產(chǎn)生有色物,通過分光光度計可測出產(chǎn)物的量,即可測知被結(jié)合在固相載體表面的酶-抗球蛋白的量,進(jìn)而可知存在于血清中的抗體的量。
160、何謂佐劑,其作用原理及優(yōu)缺點(diǎn)如阿?
佐劑又稱免疫增加劑,它與抗原合用能增高抗原的免疫原性和改變宿主的免疫反應(yīng)也達(dá)到增加細(xì)胞免疫力或提高抗體產(chǎn)量。
原理:佐劑能增強(qiáng)免疫力的機(jī)理,主要是引起遲發(fā)型過敏反應(yīng),招引大量巨噬細(xì)胞對抗原加工處理和促進(jìn)免疫反應(yīng),同時又可使抗原儲存,緩慢釋放和改變抗原性基團(tuán)的構(gòu)形。以及促進(jìn)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成的激素調(diào)節(jié)作用,其中主要靠蠟質(zhì)D成分及其它表面活性物質(zhì),大致分為下列2類作用。
(1)對抗原的作用。方式是抗原(半抗原)加佐劑作用——增強(qiáng)免疫原性。
。2)對宿主的作用。方式是抗原(半抗原),加佐劑加宿主機(jī)體——免疫應(yīng)答反應(yīng)增強(qiáng)。
優(yōu)缺點(diǎn)
。1)優(yōu)點(diǎn):①佐劑能增強(qiáng)抗原的免疫效能,并能將無抗原性的物質(zhì)(簡單半抗原)轉(zhuǎn)變成有效的抗原。②佐劑能增高循環(huán)中抗體的產(chǎn)量和提高細(xì)胞免疫力,并能延長免疫的有效期間。③佐劑能改變產(chǎn)生循環(huán)抗體的類型,例如單純注射卵自蛋白只產(chǎn)生IgG型抗體,加福氏完全佐劑-同注射則可產(chǎn)生出lgM型抗體。
。2)缺點(diǎn):①注射佐劑后引起局部硬結(jié)、腫塊、持續(xù)較長時間不消退。如注射福氏完全佐劑,除引起局部肉芽腫外,往往會造成持久的潰瘍,以致嚴(yán)重?fù)p傷組織。②佐劑能引起實驗性自身免疫病,有時能誘發(fā)腫瘤。
161、什么叫微生物與病原微生物?
在自然界中,除常見的動物和植物外,還生存著1個10分龐雜的,個體微小的生物類群。這些微小生物的個體用肉眼看不見,必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡將其放大幾百倍甚至幾萬倍才能看到,故被稱為微生物。醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站www.med126.com
自然界絕大多數(shù)微生物對人類和動植物有益而且是必須的,如用于防病治病的抗生素,幾乎全部是微生物的代謝產(chǎn)物。但是也有l(wèi)部分微生物引起人類或動植物病害,這些具有致病性的微生物稱為病原微生物。
162、病原微生物有哪些種類?如何分類?
根據(jù)微生物之間的形態(tài)、生理等生物學(xué)性狀的差異,它們被區(qū)分為許多種類,如細(xì)菌、病毒、立克次民體、衣原體、支原體、螺旋體、放線菌以及真菌等。
上述各類微生物除病毒外,其生物學(xué)位置劃為原生生物界。原生生物都是細(xì)胞型生物,按細(xì)菌結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)的差別,原生生物又分為真核生物和原核生物兩類。
真核生物有核膜、核仁、染色體等,胞漿內(nèi)也有獨(dú)立的細(xì)胞器,真菌屬真核生物。原核生物的分化程度較真核生物低,僅有原始核結(jié)構(gòu),無核膜及核仁;細(xì)胞漿中亦無完整的細(xì)胞器,細(xì)菌、衣原體、立克次民體、支原體、螺旋體和放線菌均屬原核生物。
病毒是非細(xì)胞型生物,個體更小,能通過細(xì)菌濾過器,只能在其他生物的活組織細(xì)胞中生活。過去以為病毒是具有生命現(xiàn)象的最小、最簡單的核蛋白顆粒,是自然界中的最原始的生命形態(tài)。但是,近年來用電子顯微鏡觀察,不僅看到了病毒內(nèi)部有亞單位結(jié)構(gòu),而且發(fā)現(xiàn)了比最小的病毒更小的類病毒。
163、細(xì)菌生長繁殖的基本條件有哪些?
細(xì)菌生長繁殖需要充分的營養(yǎng)物質(zhì)如水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素。除營養(yǎng)物質(zhì)
外,人工培養(yǎng)細(xì)菌尚須滿足以下幾方面環(huán)境條件。
。1)酸堿度:酸堿度對細(xì)菌的生長繁殖影響很大。大多數(shù)病原菌最適宜的酸堿度在pH7.2~7.6之間,個別細(xì)菌如霍亂弧菌好在堿性(pH8·4~9.2)環(huán)境中生長。結(jié)核桿菌則在微酸性(pH6·5~6·8)環(huán)境中生長較好。許多細(xì)菌在培養(yǎng)過程中因分解糖類而產(chǎn)酸,影響了本身的生長,因此有時需在營養(yǎng)物中加入緩沖劑,如磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀等。
。2)溫度:大多數(shù)病原菌適應(yīng)了人的體溫,其最適宜的生長溫度為37℃。低溫能使細(xì)菌的生長減慢或相對靜止、高溫在40℃以上則有抑制或殺滅細(xì)菌的作用。
根據(jù)細(xì)菌生長對溫度要求不同,可分為嗜冷菌,從0C~30℃均能生長,但最適宜的溫度是l5℃;嗜溫菌,5~50℃能生長;嗜熱菌,25C~90℃能生長。
。3)氣體:有的細(xì)菌如牛布氏桿菌及腦膜炎球菌初分離時,必須在培養(yǎng)環(huán)境中增加5~10%的二氧化碳。
。4)濕度;細(xì)菌生長需要一定濕度,使用在干燥環(huán)境中放置過久失去水分的固體培養(yǎng)基對細(xì)菌生長不利。
。5)光線:日光與紫外線均有殺菌力,因此,細(xì)菌培養(yǎng)物應(yīng)放在暗處進(jìn)行培養(yǎng)。
164、哪些細(xì)菌具有脫氧核糖核酸酶?
某些革藍(lán)氏陽性細(xì)菌(如葡萄球菌、鏈球菌、芽胞桿菌、有青白喉棒狀桿菌、化膿棒狀桿菌)和一些革藍(lán)氏陰性細(xì)菌中的某些菌株可產(chǎn)生細(xì)胞外脫氧核糖核酸酶(DNA酶)。陽性桿菌科中的賽氏菌屬也具有DNA酶。某些雷極氏變形桿菌,溶膠腸桿菌、弧菌和氣單胞菌某些菌株也含有脫氧核糖核酸酶。臨床上有對DNA酶的測定,用以判定菌株是否具有毒力(如自喉桿菌、金黃色葡萄球菌)。