生物堿類藥物（重點(diǎn)在鑒別，N的位置，有哪些電效應(yīng)）
苯烴胺類（鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿）

氮原子在側(cè)鏈上，堿性較一般生物堿強(qiáng)，易與酸成鹽。

托烷類（硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿）

阿托品和山莨菪堿是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨菪酸縮合而成，具有酯結(jié)構(gòu)。分子結(jié)構(gòu)中，氮原子位于五元酯環(huán)上，故堿性也較強(qiáng)，易與酸成鹽。

喹啉類（硫酸奎寧和硫酸奎尼丁）

奎寧和奎尼丁為喹啉衍生物，其結(jié)構(gòu)分為喹啉環(huán)和喹啉堿兩個(gè)部分，各含一個(gè)氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹啉堿微脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)。

異喹啉類（鹽酸嗎啡和磷酸可待因）

嗎啡分子中含有酚羥基和叔胺基團(tuán)，故屬兩性化合物，但堿性略強(qiáng)；可待因分子中無酚羥基，僅存在叔胺基團(tuán)，堿性較嗎啡強(qiáng)。

吲哚類（硝酸士的寧和利血平）

士的寧和利血平分子中含有兩個(gè)堿性強(qiáng)弱不同的氮原子，N1處于脂肪族碳鏈上，堿性較N2強(qiáng)，故士的寧堿基與一分子硝酸成鹽。

黃嘌呤類（咖啡因和茶堿）

咖啡因和茶堿分子結(jié)構(gòu)中含有四和氮原子，但受鄰位羰基吸電子的影響，堿性弱，不易與酸結(jié)合成鹽，其游離堿即供藥用。

鑒別試驗(yàn)：特征鑒別反應(yīng)。

1.雙縮脲反應(yīng)系芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)的特征反應(yīng)。

鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，無水銅配位化合物及其有2 個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物進(jìn)入醚層，呈紫紅色，具有4個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物則溶于水層呈藍(lán)色。

2.Vitali反應(yīng)系托烷生物堿的特征反應(yīng)。

硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿等托烷類藥物均顯莨菪酸結(jié)構(gòu)反應(yīng)，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。

3.綠奎寧反應(yīng)系含氧喹啉（喹啉環(huán)上含氧）衍生物的特征反應(yīng)硫酸奎寧和硫酸奎尼丁都顯綠奎寧反應(yīng)，在藥物微酸性水溶液中，滴加微過量的溴水或氯水，再加入過量的氨水溶液，即顯翠綠色。

4.Marquis反應(yīng)系嗎啡生物堿的特征反應(yīng)。

取得鹽酸嗎啡，加甲醛試液，即顯紫堇色。靈敏度為0.05μg. 5.Frohde反應(yīng)系嗎啡生物堿的特征反應(yīng)。

鹽酸嗎啡加鉬硫酸試液0.5ml，即顯紫色，繼變?yōu)樗{(lán)色，最后變?yōu)樽鼐G色。靈敏度為0.05μg. 6.官能團(tuán)反應(yīng)系吲哚生物堿的特征反應(yīng)。

利血平結(jié)構(gòu)中吲哚環(huán)上的β位氫原子較活潑，能與芳醛縮合顯色。

與香草醛反應(yīng)。利血平與香草醛試液反應(yīng)，顯玫瑰紅色。

與對(duì)-二甲氨基苯甲醛反應(yīng)。利血平加對(duì)-二氨基苯甲醛，冰醋酸與硫酸，顯綠色，再加冰醋酸，轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。

7.紫脲酸反應(yīng)系黃嘌呤類生物堿的特征反應(yīng)。

咖啡因和茶堿中加鹽酸與氯酸鉀，在水浴上蒸干，遇氨氣即生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉試液，紫色即消失。

8.還原反應(yīng)系鹽酸嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應(yīng)。

嗎啡具弱還原性。本品水溶液加稀鐵氰化鉀試液，嗎啡被氧化生成偽嗎啡，而鐵氰化鉀被還原為亞鐵氰化鉀，再與試液中的三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍(lán)。

可待因無還原性，不能還原鐵氰化鉀，故此反應(yīng)為嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應(yīng)。

特殊雜質(zhì)檢查：

利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異。
硫酸奎寧中“氯仿-乙醇中不溶物”的檢查鹽酸嗎啡中“其它生物堿”的檢查旋光性的差異：用于硫酸阿托品中“莨菪堿”的檢查對(duì)光選擇性吸收的差異：利血平生產(chǎn)或儲(chǔ)存過程中，光照和有氧存在下均易氧化變質(zhì)，氧化產(chǎn)物發(fā)出熒光。因此規(guī)定：供試品置紫外光燈（365nm）下檢視，不得顯明顯熒光。
吸附性質(zhì)的差異：硫酸奎寧制備過程中可能存在“其它金雞納堿”。利用吸附性質(zhì)的差異，采用硅膠G薄層進(jìn)行檢查。規(guī)定限度為0.5%.利用藥物和雜質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)上的差異。

與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀硫酸阿托品制備過程中可能帶入（如莨菪堿、顛茄堿）雜質(zhì)，因此需要檢查“其它生物堿”。利用其它生物堿堿性弱于阿托品的性質(zhì)，取供試品的鹽酸水溶液，加入氨試液，立即游離，發(fā)生渾濁。規(guī)定0.25g藥物中不得發(fā)生渾濁。

與一定試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)① 鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查② 鹽酸嗎啡中罌粟堿的檢查③ 磷酸可待因中嗎啡的檢查④ 硝酸士的寧中馬錢子堿的檢查含量測(cè)定非水溶液滴定法：

生物堿類藥物一般具有弱堿性，通�？稍诒�醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示劑或電位法確定終點(diǎn)。

⑴氫鹵酸鹽的滴定在滴定生物堿的氫鹵酸鹽時(shí)，一般均預(yù)先在冰醋酸中加入醋酸汞的冰醋酸溶液，使氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對(duì)滴定反應(yīng)的不良影響。

加入的醋酸汞量不足時(shí)，可影響滴定終點(diǎn)而使結(jié)果偏低，過量的醋酸汞（理論量的1～3倍）并不影響測(cè)定的結(jié)果。

⑵硫酸鹽的測(cè)定硫酸為二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)電離，生成SO42-，但在冰醋酸介質(zhì)中，只能離解為HSO4-，不再發(fā)生二級(jí)離解。因此，生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸的介質(zhì)中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。

硫酸阿托品的含量測(cè)定。溶劑：冰醋酸和醋酐，指示劑：結(jié)晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液顯純藍(lán)色。

硫酸奎寧的含量測(cè)定。1摩爾的硫酸奎寧可消耗3摩爾的高氯酸。

硫酸奎寧片的含量測(cè)定。硫酸奎寧經(jīng)強(qiáng)堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，在與高氯酸反應(yīng)，因此1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸。

⑶硝酸鹽的測(cè)定：

硝酸在冰醋酸介質(zhì)中雖為弱酸，但是他具有氧化性，可以使指示劑變色，所有采用非水溶液滴定法測(cè)定生物堿硝酸鹽時(shí)，一般不用指示劑而用電位法指示終點(diǎn)。

如硝酸士的寧。

⑷磷酸鹽的測(cè)定：

磷酸在冰醋酸介質(zhì)中的酸性極弱，不影響滴定反應(yīng)的定量完成，可按常法測(cè)定。

磷酸可待因。

提取中和法提取中和法是根據(jù)生物堿鹽類能溶于水而生物堿不溶于水的特性，可以采用有機(jī)溶劑提取后測(cè)定。

堿化、提取、滴定。按下列任何一種方法處理后測(cè)定：

① 將有機(jī)溶劑蒸干，于殘?jiān)�中加定量過量的酸滴定液使溶解，再用堿滴定液回滴剩余的酸；若生物堿易揮發(fā)或分解，應(yīng)在蒸至近干時(shí)，先加入酸滴定液“固定”生物堿，再繼續(xù)加熱除去殘余的有機(jī)溶劑，放冷后完成滴定。

② 將有機(jī)溶劑蒸干，于殘?jiān)�中加少量中性乙醇使溶解，任何用酸滴定液直接滴定�?/P>

③ 不蒸去有機(jī)溶劑，而直接于其中加定量過量的酸滴定液，振搖，將生物堿轉(zhuǎn)提入酸液中，分出酸液置另一錐形瓶中，有機(jī)溶劑層再用水分次振搖提取，合并水提取液和酸液，最后用堿滴定液回滴定。

測(cè)定條件的選擇能使生物堿游離的堿化試劑有氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和氧化鎂等。但強(qiáng)堿不適用于下列生物堿類藥物的游離：

① 含酯結(jié)構(gòu)的藥物，如阿托品和利血平等，與強(qiáng)堿接觸，易引起分解。

② 含酚結(jié)構(gòu)的藥物，如嗎啡，可與強(qiáng)堿形成酚鹽而溶于水，難以被有機(jī)溶劑提取。

③ 含脂肪性共存物的藥物，當(dāng)有脂肪性物質(zhì)與生物堿共存時(shí)，堿化后易發(fā)生乳化，使提取不完全。

因此氨水為最常用的堿化試劑。

提取溶劑應(yīng)具備下列條件：

① 與水不相混溶，沸點(diǎn)低，對(duì)生物堿的溶解度大，而對(duì)其它物質(zhì)的溶解度應(yīng)盡可能最小。

② 與生物堿或堿化試劑不起任何反應(yīng)。

常用者為乙醚和氯仿，其中氯仿應(yīng)用更為廣泛。

提取溶劑的用量通常應(yīng)提取4次，第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半，以后幾次所用溶劑的體積應(yīng)各為第一次的一半。如果水液體積很小時(shí)，第一次提取溶劑的用量則應(yīng)與水液相等。

提取終點(diǎn)的確定取最后一次的提取液約0.5ml，置小試管中，加鹽酸或硫酸（0.1mol/L）1ml，放水浴上將有機(jī)溶劑蒸去，放冷，滴加生物堿沉淀劑（如碘化鉍鉀試液等）1滴，無沉淀產(chǎn)生，即為提取已完全。
指示劑的選擇磷酸可待因片劑分析：
酸性染料比色法原理：在適當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中，生物堿類藥物（B）可與氫離子結(jié)合成鹽（BH+），一些酸性染料（如磺酸酞類的指示劑：溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠等）在此介質(zhì)中能解離為陰離子（In-），同時(shí)，陽離子和陰離子又能定量地結(jié)合成有色的離子對(duì)化合物，即離子對(duì)。

離子對(duì)被合適的有機(jī)溶劑提取后，形成有色溶液，可供比色測(cè)定。

影響定量分析的因素1.水相的最適pH值2.酸性染料的影響提取完全是提取常數(shù)和酸性染料陰離子的濃度密切相關(guān)的，而提取常數(shù)的大小由是與B-的種類和有機(jī)溶劑的選擇密切相關(guān)的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚藍(lán)（BTB）和溴甲酚綠等。

3.有機(jī)溶劑的影響離子對(duì)提取常數(shù)的大小還與有機(jī)溶劑的性質(zhì)有關(guān)。通常有機(jī)溶劑與離子對(duì)形成氫鍵的能力強(qiáng)，則提取效率高，如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的選擇性也較好，為最常用的有機(jī)溶劑。

4.水分的影響有有機(jī)溶劑提取有色的離子對(duì)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)防水分的混入。

5.共存物的影響：一般賦形劑，重型、酸性乙基弱堿性的物質(zhì)均不干擾測(cè)定，強(qiáng)酸可改變?nèi)玖先芤夯蚓彌_液的pH，因而對(duì)測(cè)定有干擾。

以上五種影響因素中，水相的最適pH和有機(jī)溶劑對(duì)離子對(duì)的提取完全是酸性染料比色法的試驗(yàn)關(guān)鍵。

應(yīng)用與實(shí)例硫酸阿托品片劑紫外分光光度法利血平含量測(cè)定，注意避光操作。

糖類和苷類藥物單糖和雙糖分子中有不對(duì)稱碳原子，均具有一定的比旋度。

鑒別試驗(yàn)1.灼燒試驗(yàn)：糖類用直火加熱，先熔融膨脹，后燃燒并發(fā)生焦糖臭，遺留多量的炭。蔗糖的鑒別可應(yīng)用本試驗(yàn)。

2.Fehling反應(yīng)單糖或含有半縮醛基的雙糖分子結(jié)構(gòu)中，均有醛基或酮基，都具有還原性。Fehling反應(yīng)是在堿性酒石酸銅試液（Fehling試液）中，糖將銅離子還原，生成紅色的氧化亞銅沉淀。

葡萄糖的鑒別可用此反應(yīng)（無水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液和莪術(shù)油葡萄糖均用Fehling反應(yīng)）

蔗糖的鑒別：加硫酸煮沸，用氫氧化鈉中和，再加堿性酒石酸銅試液，加熱，生成氧化亞銅的紅色沉淀。

葡萄糖和乳糖的雜質(zhì)檢查葡萄糖的一般檢查項(xiàng)目：酸度、氯化物和硫酸鹽；溶液的澄清度與顏色；乙醇溶液的澄清度；亞硫酸鹽與可溶性淀粉。

葡萄糖注射液中5-羥基糠醛的測(cè)定：紫外分光光度法。

乳糖的雜質(zhì)檢查：利用蛋白質(zhì)類雜質(zhì)遇硝酸汞試液產(chǎn)生的白色絮狀沉淀，進(jìn)行特殊雜質(zhì)“蛋白質(zhì)”的檢查。

原料藥的含量測(cè)定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不規(guī)定含量測(cè)定，規(guī)定比旋度的范圍。

制劑：葡萄糖注射液的含量測(cè)定：旋光度法。

測(cè)定中加入氨試液的作用：由于藥用葡萄糖是D-葡萄糖，而D-葡萄糖有α和β兩種互變異構(gòu)體，因而藥用葡萄糖是他們的混合物，比旋度相差甚遠(yuǎn)，而在水溶液中逐漸平衡，稱作變旋。加熱、加酸或加弱堿可加速平衡。

計(jì)算因素1.0426的由來：

換算為含稅葡萄糖濃度（c‘）時(shí)，則應(yīng)為：

葡萄糖氯化鈉注射液含量測(cè)定：硝酸銀滴定法，每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于5.844mg的NaCl.加糊精溶液以形成保護(hù)，使氯化銀沉淀呈膠體狀態(tài)，則具有較大的表面，有利于對(duì)指示劑的吸附，有利于滴定終點(diǎn)的觀察。

加硼砂溶液是為了增加pH值，因?yàn)楸酒穚H值過低，而pH值低于3.5時(shí)，則五沉淀出現(xiàn)。加入2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值為7，可促使熒光黃電離，以增大熒光黃陰離子的有效濃度，使重點(diǎn)變化敏銳。

苷類藥物苷類為糖的衍生物（如氨基糖、糖醛酸等）與另一非糖有機(jī)化合物通過糖的端基碳原子連接而成的化合物。

鑒別試驗(yàn)：

1.Keller-Kiliani反應(yīng)α-去氧甲基五碳糖的反應(yīng)α-去氧糖類，如洋地黃毒糖和磁麻糖，是由糖類分子中與羰基相鄰近的“CHOH”基失去氧，轉(zhuǎn)變?yōu)椤癈H2”后的結(jié)構(gòu)。具有較大的活潑性，由α-去氧糖與苷元結(jié)合的生成物（即苷類）容易水解。

將甾體強(qiáng)心苷溶于含有微量FeCl3（1滴9% FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁緩緩加入濃硫酸1～2ml，使成兩液層。兩液層交界面處顯棕色（甲地高辛顯紫色）；醋酸層顯藍(lán)色或藍(lán)綠色，放置1h后顯靛藍(lán)色。

2.Kedde反應(yīng)苷元的不飽和內(nèi)酯側(cè)鏈反應(yīng)。

甾體強(qiáng)心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不飽和內(nèi)酯，即丁烯內(nèi)酯，在堿性水溶液中易與芳香硝基化合物形成有色的絡(luò)合陰離子。

Kedde反應(yīng)用于去乙酰毛花苷的鑒別。

加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液各10滴，搖勻后，溶液即顯紅紫色。

3.色譜法① 紙色譜法：用于地高辛的鑒別② 薄層色譜法：用于去乙酰毛花苷及其注射液的鑒別，采用硅藻土G薄層板。

③ 高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的鑒別特殊雜質(zhì)的檢查藥物 特殊雜質(zhì) 允許限量 檢查方法洋地黃毒苷 洋地黃皂苷 本品10mg溶于2ml乙醇后，加膽甾醇的醇溶液，10min內(nèi)，不得發(fā)生沉淀地高辛 洋地黃毒苷 6% 紙色譜法甲地高辛 有關(guān)物質(zhì) 5% 高效液相色譜法去乙酰毛花苷 有關(guān)物質(zhì) 10% 薄層色譜法含量測(cè)定1.比色法：甾體強(qiáng)心苷元C17上的丁烯內(nèi)酯部分是非�；顫姷�，很容易和芳香硝基化合物（如堿性三硝基苯酚試液）形成絡(luò)合陰離子。所得絡(luò)合物在可見光去具有特征的最大吸收峰（λmax為485～495nm）。

本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量測(cè)定2.熒光法：利用L-抗壞血酸與過氧化氫等實(shí)際可使地高辛或洋地黃毒苷產(chǎn)生熒光的原理，提高了定量分析的靈敏度，從而可用于每片含主藥量分別僅為0.25mg和0.1mg的片劑的含量測(cè)定。

地高辛片含量，含量勻度（限度為20%），溶出度（限度為65%，轉(zhuǎn)籃，100r/min，60min）

甲地高辛溶出度測(cè)定與地高辛一樣，限度規(guī)定相同。

3.色譜法：

① 柱色譜法：用于洋地黃毒苷原料藥測(cè)定的純化處理② 高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的含量測(cè)定，內(nèi)標(biāo)：洋地黃毒苷。