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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 > 理論教學(xué) > 基礎(chǔ)學(xué)科 > 中國幽門螺桿菌研究 > 正文:檢測幽門螺桿菌感染幾種方法的比較
    

檢測幽門螺桿菌感染幾種方法的比較

  自1983年Warrn和Marshall從胃粘膜成功分離出幽門螺桿菌(Helicobacter Pylori,Hp)后,與胃炎及潰瘍病的關(guān)系引人關(guān)注,并指出Hp可能是其病因之一。檢測Hp感染方法較多。本文對95例胃粘膜組織行細(xì)菌培養(yǎng)、尿素酶試驗、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin-Starry銀染檢測Hp的方法比較。力求尋找出簡便、經(jīng)濟(jì)、敏感性、特異性高的方法,實用于臨床診斷Hp感染。

  1 對象和方法

  1.1 對象

  連續(xù)收集1990—03~1990—06因上消化道癥狀行內(nèi)鏡檢查(Olympus GIF XQ10)。胃鏡診斷慢性胃炎及消化潰瘍患者95例。取距幽門5cm內(nèi)的胃竇粘膜5塊,分別供以上各種檢測用。男74例,女21例;17歲~62歲,平均年齡42.8歲;其中慢性胃炎30例、胃潰瘍8例,球部潰瘍37例,復(fù)合潰瘍20例。

  1.2 方法

 、偌(xì)菌培養(yǎng):將活檢標(biāo)本接種于肉浸液加8%~10%羊血及抗菌混合液的瓊脂平板中,于防良厭氧缺罐(5%O2,7%CO2、80%N2、8%H2、濕度98%)內(nèi),37℃、培養(yǎng)3d~7d,見1mm~2mm大小的露滴樣、光滑、灰白色菌落,菌落涂片鏡檢生化鑒定(尿素酶、氧化酶、觸酶等)。7d不見菌落為陰性。②尿素酶試驗:采用改良Christensen細(xì)菌尿素酶鑒定試劑。取0.1ml試劑于平皿圓孔中,將胃粘膜置于此孔中,試劑由淡黃變淡紅色為陽性,不變色為陰性,其中1h內(nèi)變色為陽性,2h~5h變色為延遲性。③直接涂片:粘膜涂于潔凈玻片上,范圍為1.5cm×2.5cm大小,酒精燈固定,革蘭染色,10×100倍油鏡觀察。Hp為革蘭陰性呈∽、C彎曲狀或螺旋狀,形態(tài)典型。④HE染色:常規(guī)HE染色,鏡檢。40×10倍光鏡下生病理診斷,100×10銳油鏡下觀察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面,胃小凹及胃腺腔中,呈淡紅變彎曲狀物,較難分辨。⑤改良W-S銀染:將脫蠟切片于43℃的1%AgNO3液中浸潤15min,準(zhǔn)備顯色劑。將浸染的切片于盛有顯色劑立式染缸中加蓋、加熱維持恒溫70℃約8min~10min,切片呈淺棕色。取出切片,熱水徹底沖洗,脫水,透明,中性樹脂封片。100×10倍鏡下觀察Hp,其在淡黃色背景上呈棕色或褐色彎曲狀物,易辨認(rèn)。⑥Giemsa染色:將脫蠟切片于Giemsa稀釋液中浸染20min,待組織呈藍(lán)色,蒸餾水漂洗,PBS液分色約3min~5min,透明,中性脂封片。100×10倍鏡下觀察。Hp呈深藍(lán)色彎曲狀物,較易分辨。⑦菌量分級:菌Marshall分級法0級;無菌;Ⅰ級:認(rèn)真尋找可見;Ⅱ級:多數(shù)高倍視野可見;Ⅲ級:高倍視野很多或成堆成串。

  所有資料按四格表行X2檢驗,若例數(shù)小于40或理論值小于1,則采用確切概率法計算。

  2 結(jié)果

表1 檢測Hp各種方法的檢出率

檢測方法

n

陽性

陰性

假陽性

假陰性

敏感性(%)

特異性(%)

檢出率(%)

細(xì)菌培養(yǎng)

95

60

35

0

8

88.2

100.0

63.2

尿素酶試驗

95

66

29

1

3

95.6

96.4

69.5

直接涂片

95

58

37

1

10

85.0

96.4

61.1a

HE染色

95

56

39

0

12

69.0

100.0

58.9a

Giemsa染色

95

68

27

2

2

97.1

92.5

71.5

改良W-S

95

71

24

4

1

98.5

86.7

74.7

aP<0.05

表2 胃粘膜組織切片三種染色菌量分級

染色方法

n

++

+++

陽性率(%)

HE

95

27

22

7b

39

58.9

Giemsa

95

16

24

28

27

71.6

改良W-S

95

14

30

27

24

74.7

bP<0.01

  在各種方法中,改良W-S染檢出率最高,HE染最低,經(jīng)X2檢驗,差異有顯著性(P<0.05);尿素酶試驗、Giemsa染與改良W-S染比較,差異無顯著性(P>0.05);且其特異性、敏感性均在92%以上。表2之菌量分級,HE染與改良W-S染比較,差異有顯著性(P<0.05);Giemsa染與改良W-S染比較,差異無顯著性(P>0.05)。

  3 討論

  本文對幾種常用檢測Hp感染的方法進(jìn)行比較,其敏感性、特異性、檢出率及方法難易、速度、費用上均有不同。檢出率以改良W-S染最高,HE染最低;特異性以培養(yǎng)法最高。細(xì)菌培養(yǎng)是鑒定Hp陽性最可靠的方法,特異性100%,但培養(yǎng)需要一定條件和技術(shù),影響因素多,敏感性較低,時間長,一般單位難以開展。HE染色作病理診斷的同時兼作Hp檢測。但其敏感性差,菌量分級少,Hp難以分辨。改良W-S銀染是一種檢出率最高的經(jīng)典方法,但其操作方法復(fù)雜,顯色劑難配制。每次染色需加熱、恒溫及配顯色劑,熱水沖洗不徹底,雜質(zhì)影響觀察,銀試劑貴耗時耗資。Giemsa染與改良W-S染在檢出率及菌量分級方面比較,差異均無顯著性(P>0.05)。特異性高,方法簡單、便宜,是較理想的組織切片診斷Hp方法,這與國外學(xué)者報道一致。直接涂片Hp呈革蘭陰性菌,形態(tài)典型,有簡單,快速(1h~2h內(nèi))之特點,但敏感性低。尿素酶試驗具有快速(幾min至5h內(nèi))、簡便、經(jīng)濟(jì)、敏感性及特異性高的優(yōu)點,與直接涂片法聯(lián)用可提高敏感性及特異性。

  尿素酶試驗聯(lián)合直接涂片法是檢測Hp感快速、簡單、經(jīng)濟(jì)、特異性、敏感性高的方法,有利于各級醫(yī)院臨床推廣使用;Giemsa染是較理想組織切片診斷Hp感染的方法;培養(yǎng)及改良W-S銀染可在有條件單位開展。

張 琍 曾明新 徐惠芳

衡陽醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院(衡陽 421000)

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