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天麻素的純化技術(shù)
近年來有學(xué)者采用了大孔樹脂吸附法-醇沉純化天麻素，選擇非極性至極性共計(jì)6種不同極性的樹脂:HPD-400，HPD-500，HPD-600，AB-8，D101，DM130。采用靜態(tài)吸附法以天麻素的比吸附量和解吸附率為指標(biāo)，優(yōu)選出AB-8吸附樹脂，上柱藥液生藥濃度為1mL含0．5g生藥，上樣量為2g/g(干樹脂:藥材)，以1～2BV/h的流速上柱循環(huán)吸附1h，徑高比1∶7，分別用2BV蒸餾水，6BV的5%乙醇以3～4BV/h的流速洗脫，棄去水洗液，收集5%乙醇洗脫液，按照此工藝天麻提取物經(jīng)大孔吸附樹脂純化后，出膏率亦從20．72%降低至5．87%。經(jīng)過測定天麻素的含量發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用大孔樹脂的天麻的含量為11．21%。經(jīng)3批驗(yàn)證，此工藝可以穩(wěn)定地將提取物中天麻素含量純化到11．00%以上，純度不高。然后結(jié)合醇溶液調(diào)pH沉淀法對天麻大孔樹脂純化物進(jìn)一步去雜質(zhì)，加95%乙醇至醇體積分?jǐn)?shù)80%，靜置24h，濾過，用40%的NaOH溶液調(diào)至pH8．0，靜置24h，濾過，收集濾液，減壓濃縮，天麻提取物的出膏率為2．33%，其中天麻素的含量為23．50%，天麻總苷含量為33．52%，該工藝較傳統(tǒng)醇沉工藝大大提高提取物天麻素的含量，且工藝穩(wěn)定、可靠［23］。劉東鋒等［24］發(fā)明了一種采用ODS反相硅膠法精制天麻素的方法，具體的方法是采用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇水溶液回流提取4次，每次提取3h，提取液回收溶劑至無醇味，過聚酰胺樹脂純化，分別用體積分?jǐn)?shù)20%、40%、60%的乙醇水溶液梯度洗脫，收集40%和60%洗脫液合并、濃縮。ODS硅膠裝柱，另取ODS硅膠與濃縮液拌樣，揮干溶劑，上柱，用體積分?jǐn)?shù)55%的乙腈水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥即得產(chǎn)品，從1kg天麻粉中得到純品10．1g，純度為99．3%醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.payment-defi.com。
天麻素的檢測技術(shù)
天麻素的檢測技術(shù)有高效液相色譜法、分光光度法、高效毛細(xì)管電泳、薄層色譜法和化學(xué)法，高效液相色譜法為《中國藥典》規(guī)定方法，在天麻素檢測中應(yīng)用最為廣泛。高效液相色譜法2010年版《中國藥典》規(guī)定天麻素的檢測方法是高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChroma-tography，HPLC)。天麻素提取的工藝參數(shù):稀乙醇為溶劑，料液比1∶25，熱回流提取3h，放冷，稱重補(bǔ)足重量。色譜條件:色譜柱InertsilODS-3C18柱(5μm，150mm×4．6mm)。流動相:乙腈0．05%磷酸(3∶97)，流速1mL/min，檢測波長220nm。流動相系統(tǒng)除藥典收載的以外，還有許多類似的檢測方法及系統(tǒng)，主要有甲醇-磷酸鹽溶液-水、乙腈-水-磷酸、甲醇-水-三乙胺、甲醇-水-冰醋酸系統(tǒng)等，檢測波長多為270nm、22lnm、220nm等。也有研究報(bào)道建立了液質(zhì)技術(shù)測定天麻中天麻素含量［25］。紫外分光光度法保玉心等［26］采用紫外分光光度法(UV)在220nm波長下進(jìn)行天麻素的紫外檢測，張芙蓉等［27］在223nm波長下進(jìn)行天麻素的紫外檢測，該方法快速、簡便，UV法經(jīng)HPLC驗(yàn)證，結(jié)果表明UV法和HPLC兩種方法測定結(jié)果之間并無顯著性差異。近紅外光譜法近紅外光譜法(Near-infraredspectroscopy，NIS)是用可見光和紅外光之間波長范圍的光譜進(jìn)行分析的方法。杜偉鋒等［28］采用近紅外光譜法對不同產(chǎn)地的天麻中天麻素含量進(jìn)行快速測定，以HPLC分析值作為參照，采用傅里葉變換近紅外漫反射光譜技術(shù)采集天麻的近紅外光譜，結(jié)合偏最小二乘法(PLS)建立天麻素含量的快速測定方法，該方法準(zhǔn)確、快速、簡便，可實(shí)現(xiàn)大批量樣品的快速分析。蒙杰丹等［29］也采用近紅外光譜結(jié)合偏最小二乘法建立了同時(shí)測定通天口服液中天麻素與芍藥苷含量的方法。高效毛細(xì)管電泳法高效毛細(xì)管電泳(High-PerformaceCapillaryElectrophoresis，HPCE)是荷電粒子或離子以電場為驅(qū)動力，薄層色譜法熊慧林等［31］利用薄層色譜法(Thinlayerchromatography，TCL)鑒別天麻素，薄層板為硅膠G薄層板，展開劑為醋酸乙酯-甲醇-水(9∶1∶0．2)，顯色劑是質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的磷鉬酸乙醇溶液，波長600nm，單波長線性掃描。王孟等［32］也采用相同的展開劑，顯色劑是質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的磷鉬酸溶液，105℃加熱使斑點(diǎn)清晰，在與天麻、天麻素對照液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，分離清晰，陰性對照無干擾�；瘜W(xué)測定法化學(xué)定性［33］是利用天麻乙醇提取液與硝酸鹽作用，加熱，溶液呈玫瑰紅，并發(fā)生黃色沉淀。也有報(bào)道使用魯米諾-過氧化氫-高錳酸鉀發(fā)光體系，對天麻素進(jìn)行了定量分析［34］。
展望
天麻素有鎮(zhèn)靜、催眠、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫力等作用，在治療心腦血管病、微循環(huán)系統(tǒng)疾病，頭痛眩暈等方面療效顯著。我國老齡化社會日漸形成，高血壓、高血脂群體不斷增大，為具有降壓、降脂療效的天麻素提供了巨大的市場空間。除了以上這些在天麻提取中已經(jīng)成熟應(yīng)用的技術(shù)外，隨著科學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，越來越多的提取新技術(shù)、新方法，如超臨界流體萃取、雙水相萃取、分子蒸餾技術(shù)、膜分離技術(shù)等以后可能將會運(yùn)用到天麻素提取分離研究上，將會在提高天麻制劑質(zhì)量、減少服用劑量、提高生產(chǎn)效率、降低環(huán)境污染等方面起到積極的推動作用，必將極大地推動天麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
作者：陳琛 李新生 周建軍 楊培君 徐頂巧 馮振斌 田惠玲 趙斌 單位：陜西理工學(xué)院 陜西省天麻山茱萸技術(shù)研究工程中心 陜西漢王藥業(yè)有限公司
