1 資料與方法
1.1 一般資料 2007年4月至2008年1月在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院住院的HSP患兒44例,男24例,女20例, 5~13歲,均符合《實(shí)用兒科學(xué)》第七版HSP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。急性期44例均有皮膚紫癜,其中初次發(fā)作40例,2次發(fā)作4例(初次發(fā)病恢復(fù)后1個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)2例,2個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)1例,1年內(nèi)復(fù)發(fā)1例);緩解期40例(其余4例拒絕抽血),為患兒臨床癥狀(皮膚紫癜、腹痛、關(guān)節(jié)痛)消失2周之后;所有患兒入院前2周內(nèi)未使用過(guò)激素、抗凝劑及止血?jiǎng)┑人幬,并排除血液、肝臟及心臟疾病。患兒住院期間每周化驗(yàn)?zāi)虺R?guī)2次,出院后每周化驗(yàn)1次,隨訪6個(gè)月。按中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)組小兒腎小球疾病的臨床分類、診斷及治療標(biāo)準(zhǔn)[5],根據(jù)在HSP病程中(均在6個(gè)月內(nèi))是否出現(xiàn)血尿和/或蛋白尿,將HSP患兒分為腎臟受累組與非腎臟受累組。腎臟受累組:出現(xiàn)血尿和/或蛋白尿,并排除其他原因?qū)е卵蚣暗鞍啄虻哪I臟疾病;非腎臟受累組:HSP發(fā)病6個(gè)月化驗(yàn)?zāi)虺R?guī)正常。健康對(duì)照組18例,為同期在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院查體中心健康查體兒童,男10例,女8例,4~12歲,中位年齡7.86歲,既往無(wú)血液、肝臟、腎臟及心臟疾病。
1.2 儀器與試劑 流式細(xì)胞儀由德國(guó)PAROPARPEC公司生產(chǎn);酶標(biāo)儀為澳大利亞anthos2010型; PECD61、FITCCD41a 、FITCCD62P等單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)BD公司;vWF檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司。
1.3 標(biāo)本采集 所有受檢者晨起抽靜脈血,分別置于含有1/10體積0.109?mmol/L枸櫞酸鈉抗凝液的2個(gè)試管中,充分混勻,30?min內(nèi)送檢。其中1管全血用于測(cè)定CD41a/CD61及CD62P;另1管用于測(cè)定vWF。所有標(biāo)本以3?000?r/min(離心半徑10?cm)離心10?min,取血漿置-40?℃冰箱保存,2周內(nèi)檢測(cè)。
1.4 檢測(cè)方法 將熒光標(biāo)記單克隆抗體PECD61分別加入3組試管中,各10?μL,第1組試管加入全血5?μL,第2、3組試管先分別加入FITCCD41a、FITCCD62P各10?μL,然后分別加入全血5?μL;振蕩器混勻, 在25?℃室溫避光孵育20?min后,加預(yù)冷的1%多聚甲醛1?mL震蕩混勻,置于4?℃冰箱避光孵育20?min,然后利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。上機(jī)時(shí)首先用第1組試管根據(jù)前向角和側(cè)向角光散射信號(hào)設(shè)定血小板門(mén),然后通過(guò)CD61標(biāo)記進(jìn)一步確認(rèn)設(shè)門(mén)內(nèi)血小板在95%以上。測(cè)定方法嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行。vWF的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法,檢測(cè)前標(biāo)本置37?℃水浴中迅速溶化,然后按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行,計(jì)量資料用±s表示,組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.payment-defi.com。
2 結(jié) 果
2.1 HSP患兒CD41a/CD61、CD62P及vWF的水平 見(jiàn)表1。 HSP患兒急性期CD41a/CD61、 CD62P、 vWF水平均高于健康對(duì)照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01); 治療后患兒皮疹、 腹痛、 關(guān)節(jié)痛消失, 進(jìn)入緩解期時(shí)三者水平均下降, 急性期與緩解期比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。患兒緩解期CD41a/CD61、CD62P及vWF水平雖然略高于健康對(duì)照組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。表1 HSP患兒急性期、緩解期及對(duì)照組CD41a/CD61、CD62P、vWF水平的比較