凝血酶凍干粉針—凝血酶的測(cè)定—酶效價(jià)測(cè)定法

本方法采用酶效價(jià)測(cè)定法測(cè)定凝血酶凍干粉針中凝血酶的效價(jià)。

本法系比較不同濃度凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品（S)與供試品（T)對(duì)纖維蛋白原的初凝時(shí)間，以測(cè)定供試品的效價(jià)。

1. 纖維蛋白原

2. 0.9％氯化鈉溶液

3. 0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液

1. 纖維蛋白原溶液的制備

取纖維蛋白原約30mg，精密稱(chēng)定，用0.9％氯化鈉溶液1.5mL溶解，加凝血酶溶液0.1mL（約3單位)，快速搖勻，室溫放置約1小時(shí)至完全凝固，取出凝固物，用水洗至洗出液加硝酸銀試液不產(chǎn)生混濁，在105°C干燥3小時(shí)，稱(chēng)取重量，計(jì)算纖維蛋白原中漢凝固物質(zhì)的含量（％)，然后用0.9％氯化鈉溶液制成含0.2％凝固物的纖維蛋白原溶液，用0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.4，再用0.9％氯化鈉溶液稀釋成含0.1％凝固物的溶液，備用。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

取凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品，用0.9％氯化鈉溶液分別制成每1mL中含5.0單位，6.4單位，8.0單位，10.0單位的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。另取內(nèi)經(jīng)1cm，長(zhǎng)10cm的 試管4支，各精密加入纖維蛋白原溶液0.9mL，置37±5°C的水浴中保溫5分鐘，再分別精密量取上述4種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各0.1mL，迅速加入上述各試管中，搖勻，立即計(jì)時(shí)，置37±5°C的水浴中，觀察纖維蛋白的 初凝時(shí)間，每種濃度測(cè)5次，求平均值（5次測(cè)定中的最大值與最小值的差不得超過(guò)平均值的10％，否則重測(cè))。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度應(yīng)控制凝結(jié)時(shí)間在14～60秒為宜。在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)（單位)為橫坐標(biāo)，凝結(jié)時(shí)間（秒)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。

注：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

取本品3評(píng)，分別精密稱(chēng)定其內(nèi)容物的重量，每瓶按標(biāo)示量分別加0.9％氯化鈉溶液制成與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度相當(dāng)?shù)娜芤海�精密吸�?.1mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備方法平行測(cè)定5次，求出凝結(jié)時(shí)間的平均值（誤差要求同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn))，用回歸方程求得效價(jià)（單位)

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.866。