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凝血酶凍干粉針—凝血酶的測(cè)定—酶效價(jià)測(cè)定法

醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫(kù)中心 藥學(xué)論壇 凝血酶凍干粉針—凝血酶的測(cè)定—酶效價(jià)測(cè)定法
方法名稱(chēng):
凝血酶凍干粉針—凝血酶的測(cè)定—酶效價(jià)測(cè)定法
應(yīng)用范圍:

本方法采用酶效價(jià)測(cè)定法測(cè)定凝血酶凍干粉針中凝血酶的效價(jià)。

本方法適用于凝血酶凍干粉針。
方法原理:

本法系比較不同濃度凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)對(duì)纖維蛋白原的初凝時(shí)間,以測(cè)定供試品的效價(jià)。

試劑:

1. 纖維蛋白原

2. 0.9%氯化鈉溶液

3. 0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液

儀器設(shè)備:
試樣制備:

1. 纖維蛋白原溶液的制備

取纖維蛋白原約30mg,精密稱(chēng)定,用0.9%氯化鈉溶液1.5mL溶解,加凝血酶溶液0.1mL(約3單位),快速搖勻,室溫放置約1小時(shí)至完全凝固,取出凝固物,用水洗至洗出液加硝酸銀試液不產(chǎn)生混濁,在105°C干燥3小時(shí),稱(chēng)取重量,計(jì)算纖維蛋白原中漢凝固物質(zhì)的含量(%),然后用0.9%氯化鈉溶液制成含0.2%凝固物的纖維蛋白原溶液,用0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0~7.4,再用0.9%氯化鈉溶液稀釋成含0.1%凝固物的溶液,備用。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

取凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品,用0.9%氯化鈉溶液分別制成每1mL中含5.0單位,6.4單位,8.0單位,10.0單位的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。另取內(nèi)經(jīng)1cm,長(zhǎng)10cm的 試管4支,各精密加入纖維蛋白原溶液0.9mL,置37±5°C的水浴中保溫5分鐘,再分別精密量取上述4種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各0.1mL,迅速加入上述各試管中,搖勻,立即計(jì)時(shí),置37±5°C的水浴中,觀察纖維蛋白的 初凝時(shí)間,每種濃度測(cè)5次,求平均值(5次測(cè)定中的最大值與最小值的差不得超過(guò)平均值的10%,否則重測(cè))。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度應(yīng)控制凝結(jié)時(shí)間在14~60秒為宜。在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上,以標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)(單位)為橫坐標(biāo),凝結(jié)時(shí)間(秒)為縱坐標(biāo),計(jì)算回歸方程。

注:“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一!熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟:

取本品3評(píng),分別精密稱(chēng)定其內(nèi)容物的重量,每瓶按標(biāo)示量分別加0.9%氯化鈉溶液制成與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度相當(dāng)?shù)娜芤海芪?.1mL,按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備方法平行測(cè)定5次,求出凝結(jié)時(shí)間的平均值(誤差要求同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)),用回歸方程求得效價(jià)(單位)

參考文獻(xiàn):

中華人民共和國(guó)藥典,國(guó)家藥典委員會(huì)編,化學(xué)工業(yè)出版社,2005年版,二部,p.866。

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