桂林西瓜霜噴劑—靛玉紅和苦參堿的測定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定桂林西瓜霜噴劑中靛玉紅和苦參堿的含量。

本方法適用于中成藥桂林西瓜霜噴劑。

供試品于索氏提取器中經(jīng)氯仿加熱回流，提取液回收，濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長λ_S=540nm，λ_R=650nm測量靛玉紅，在波長λ_S=510nm，λ_R=650nm測量苦參堿吸收度積分值，分別計(jì)算其含量。

1.苯

2.丙酮

3.氯仿

4.甲苯

5.乙醇

6.濃氨水

1儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3薄層自動(dòng)鋪板器

1.4定量點(diǎn)樣毛細(xì)管

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用20cm×10cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G

1.對照品溶液的制備

分別精密稱取靛玉紅和苦參堿對照品適量。靛玉紅對照品用氯仿溶解制成濃度為0.081mg/mL溶液；苦參堿對照品用甲醇溶解制成濃度為1.8mg/mL溶液。

2,對照藥材溶液的制備

各取青黛、山豆根對照藥材粉末約1g，置具塞三角燒瓶中。分別加入氯仿50mL（其中山豆根對照藥材先加入氨水2mL潤濕)，冷浸過夜。濾過，濾液水溶液濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇適量使溶解即得。

3.供試品溶液的制備

精密稱取供試品約2g，加入氯仿100mL于索氏提取器中回流提取至提取液近無色（其中苦參堿含量測定供試品先加氨水2mL使?jié)櫇?，提取液回收溶劑，濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇適量使溶解并定容于5mL量瓶中，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

2.1對照品點(diǎn)樣

精密吸取靛玉紅對照品溶液4.0,6.0,8.0,10.0,12.0μL,點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上。另外精密吸取苦參堿對照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0和5.0μL,點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

2.2供試品點(diǎn)樣

精密吸取供試液10μL，靛玉紅對照品溶液6μL和8μL，點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，；同樣吸取供試品10μL，苦參堿對照液2μL和3μL，點(diǎn)于另一硅膠G薄層板上。

注：供試品溶液與對照品溶液應(yīng)分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好靛玉紅對照品溶液和供試品溶液的兩塊薄層板分別放入展開缸的展開劑中，以苯-氯仿-丙酮(5:4:1)為展開劑，展距10cm，取出薄層板，晾干，可見光下檢識(shí)。供試品色譜與青黛對照藥材和靛玉紅對照品色譜在相應(yīng)位置上顯相同紫紅色斑點(diǎn)。

同樣將點(diǎn)好苦參堿對照品和供試品溶液的薄層板分別放入展開缸的展開劑中，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨水(20:20:3:1)為展開劑（雙槽展開缸，預(yù)飽和15min)，展距10cm，碘化鉍鉀試液噴霧顯色，供試品色譜與山豆根對照藥材和苦參堿對照品色譜在相應(yīng)位置顯相同橙紅色斑點(diǎn)。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將6.2.1項(xiàng)下的薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長進(jìn)行掃描，于波長λ_S=540nm，λ_R=650nm測量靛玉紅，在波長λ_S=510nm，λ_R=650nm測量苦參堿吸收度積分值，以斑點(diǎn)面積積分值對點(diǎn)樣量作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.供試品溶液的測定

將6.2.2項(xiàng)下的薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長進(jìn)行掃描，于波長λ_S=540nm，λ_R=650nm測量靛玉紅，在波長λ_S=510nm，λ_R=650nm測量苦參堿吸收度積分值，分別計(jì)算其含量。

陳勇，甄漢深，石勇新，等.薄層掃描法測定桂林西瓜霜噴劑中靛玉紅和苦參堿的含量.中成藥，1998，20（7)：13-14