方法名稱:
香連丸-小檗堿的測定-薄層掃描法…" />
方法名稱: |
香連丸-小檗堿的測定-薄層掃描法 |
應(yīng)用范圍: |
本方法采用薄層掃描法測定香連丸中小檗堿的含量。 本方法適用于中成藥香連丸的測定。 |
方法原理: |
供試品于索氏提取器中經(jīng)鹽酸-甲醇加熱回流,過濾,濾液蒸干,并用鹽酸-甲醇稀釋,制成供試液。點(diǎn)樣、展開,用薄層掃描儀進(jìn)行掃描,于波長λS=350nm,λR=365nm測量鹽酸小檗堿吸收度積分值,計(jì)算其含量。 |
試劑: |
1. 鹽酸 2 .甲醇 3 .苯 4.醋酸乙酯 5.異丙醇 6.氨水 |
儀器設(shè)備: |
1儀器 1.1薄層掃描儀 1.2涂布器 應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。 1.3點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。 1.4展開室 可用適合薄層板大小的專用玻璃缸,底部平底或雙槽,蓋子須密閉。 2材料 2.1玻板 用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。 2.2吸附劑 硅膠G其顆粒大小一般要求直徑為10~40μm。 |
試樣制備: |
1.對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量,加鹽酸-甲醇(1:100)溶解并配成濃度為14.4,28.8,43.2,57.6,72.0,86.4,115.2,161.1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 2.供試品溶液的制備 精密稱取香連丸適量(相當(dāng)于黃連0.1g)置100mL量瓶中,加鹽酸-甲醇(1:100)95mL,60℃水浴溫浸30min,強(qiáng)超聲處理1h,室溫放置24h,加鹽酸-甲醇(1:100)定容于5mL量瓶中,作為供試品溶液。 注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一!熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。
|
操作步驟: |
1薄層板制備 將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.25~0.5mm)取下涂好薄層的玻板,于室溫下,置水平臺(tái)上晾干,在反射光及透射光下檢視,表面應(yīng)均勻,平整,無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染,于110℃烘30分鐘,冷卻后立即使用或置干燥箱中備用,或用商品預(yù)制板。 2點(diǎn)樣 2.1對(duì)照品點(diǎn)樣 各吸取標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的鹽酸小檗堿溶液1μL點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊1.0~1.5cm,樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況,以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。 2.2供試品點(diǎn)樣 精密吸取69.2μg/mL供試品溶液和161.2μg/mL對(duì)照品溶液各1μL,分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊1.0~1.5cm,樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況,以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。 3展開 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨水(46:15:12:5:4滴)為展開劑,上行展開揮干溶劑后測定。 4含量測定 4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板,周圍用膠布固定,進(jìn)行熒光掃描測定,激發(fā)光波長343nm,測量對(duì)照品熒光強(qiáng)度,以鹽酸小檗堿點(diǎn)樣量(μg)對(duì)熒光強(qiáng)度積分值回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4.2供試品測定 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板,周圍用膠布固定,進(jìn)行熒光掃描測定,激發(fā)光波長343nm,測量供試品熒光強(qiáng)度,計(jì)算含量。 |
參考文獻(xiàn): |
張小榮,刑黎明,王蘭,等. 熒光薄層法測定香連丸中小檗堿.西北藥學(xué)雜志,1998,13(6):284 |