方法名稱： |
黃連上清丸—黃芩苷的測定—高效液相色譜法 2 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用反相高效液相色譜法測定黃連上清丸中黃芩苷的含量。 |
方法原理： |
將供試品用甲醇超聲提取，加入甲醇定容，過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品液10µL，分別注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長274nm處檢測黃芩苷吸收值，以外標法計算含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2. 醋酸 |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Hybersil ODS柱 (200 × 4.6mm，5µm)。 1.3 紫外吸收檢測器 2 色譜條件 2.1 流動相：甲醇 水 醋酸 = 40 60 1 2.2 流速：1.0mL/min 2.3 檢測波長：274nm 2.4 柱溫：30℃ |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取研細的本品粉末1.5g。 2. 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷標準品(60℃減壓干燥4h)12.5mg，置25mL量瓶中，加50%甲醇適量，振搖，使對照品溶解，用50％甲醇稀釋至刻度，搖勻。超聲除去氣泡，用50%甲醇至刻度，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液2.0mL置10mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，用0.45µm微孔濾膜過濾，制成每1mL含黃芩苷0.1µg的溶液，作為對照品溶液。 3. 標準溶液的制備 分別精密量取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL分別置10mL量瓶中，用50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標準曲線的系列濃度標準溶液。 4.供試品溶液的制備 將供試品精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，用50％甲醇補足減失重量，用0.45µm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準確度應(yīng)符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標準曲線的繪制 精密吸取上述標準溶液10µL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長274nm處測定黃芩苷的吸收值，每個濃度點進樣2次測定。以標準溶液進樣量對峰面積繪制標準曲線，進行線性回歸，得到標準曲線方程。 2. 供試品的測定 精密吸取對照品溶液及供試品溶液10µL，分別注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長274nm處測定黃芩苷的吸收值，用外標法計算出其含量。 |
參考文獻： |
姜紅，董潤芬，崔萍. RPHPLC法測定黃連上清丸中黃芩苷的含量. 天津藥學，2002，14(3)：72-73. |
